AT 550 琥珀酰亚胺酯-高质量胺反应染料

AT NHS酯很容易与蛋白质的氨基反应。我们拥有提供各种高质量的胺反应染料，用于标记蛋白质和其他含胺底物。染料的光谱范围从紫外350nm到近红外750nm。常用的胺反应试剂是N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）酯。NHS酯很容易与含有氨基的化合物反应，在染料和蛋白质之间形成化学稳定的酰胺键。然而，氨基必须是非质子化的才能具有活性。因此，必须将溶液的pH调节到非常高的水平，以获得高浓度的未质子化氨基。另一方面，NHSesterscan还与溶液中的氢氧根离子反应，导致形成不再具有活性的“游离”染料。由于不可避免的水解速率会随着氢氧根离子的浓度而增加，因此pH值应保持在较低的范围内。pH 8.3的缓冲溶液已被发现是这些冲突需求之间的一个很好的折衷方案

艾美捷AT 550 琥珀酰亚胺酯：

Cat#：B-CHM502/B-CHM503/B-CHM504/B-CHM505

规格：1 mg

储存：储存温度为-20°C，避光保存。

形态：结晶固体

储存条件：储存温度为-20°C，避光。

稳定性：在适当的储存条件下稳定至少12个月

AT 550 琥珀酰亚胺酯规格：

MW：包括抗衡离子的染料的分子量，单位为g/mol；M+：染料阳离子的分子量（HPLC_MS乙腈/水0.1vol-%三氟乙酸）；?m： 与AT染料NHS酯结合时分子质量的增加；?q： 与AT染料NHS酯结合的电荷增加；εmax：最长波长吸收最大值下的摩尔十年消光系数M-1cm-1；CF260=ε260ε/最大值；CF280=ε280ε/最大值

用AT NHS标记蛋白质的建议方案：

AT NHS酯很容易与蛋白质的氨基反应。NHS酯结合的最佳pH范围是pH

8.0-9.0。在这个pH范围内，蛋白质的氨基，特别是赖氨酸的氨基，被充分去质子化以进行快速偶联。

所需材料：

溶液A:PBS缓冲液（磷酸盐缓冲盐水，pH 7.4）：将8 g NaCl、0.2 g KCl、1.44 g Na2HPO4-2H2O和0.24 g KH2PO4溶解在1L蒸馏水中。

溶液B:0.2 M碳酸氢钠溶液，用2 M氢氧化钠将pH调节至9.0。

溶液C：将20份溶液A与1份溶液B混合，得到pH为8.3的标记缓冲液。将此溶液储存在密封瓶中，以保持长期稳定性。

溶液D：将1.0 mg NHS酯溶解在50-200 ul无水无胺二甲基亚砜（DMSO）中，或

乙腈。

染料原液的制备与处理

在测定染料储备溶液的浓度时，我们建议取等量的样品，用酸化乙醇（0.1体积%三氟乙酸）稀释，以避免染料聚集，在某些情况下（AT 565和AT 590），避免无色内酯的形成。根据溶剂的质量，这种储备溶液在室温下不稳定，必须在20℃下避光保存。

活性分子可能发生水解并失去活性。我们建议尽可能在开始标记反应之前立即新鲜制备染料原液。应当注意的是，诸如DMSO或DMF的溶剂应当不含亲核性和/或碱性杂质。这些化合物可以与NHS酯官能团反应，降低偶联效率。

缀合物制备

蛋白质溶液不能含有任何含胺物质，如Tris、游离氨基酸或铵离子。溶解在胺缓冲液中的抗体应针对溶液A进行透析，并且通过溶液C中描述的步骤实现8.3的期望偶联pH。

1、为了实现2-3的平均标记度（DOL）（染料与蛋白质的比例），在轻轻摇动的同时，向蛋白质溶液中轻轻添加三倍摩尔过量的活性染料（溶液D）。由于蛋白质和标记试剂之间的反应性不同，可能会发生变化。在反应过程中有必要优化染料与蛋白质的比例，以获得所需的DOL。必须使用更高比例的NHS酯和蛋白质来提高标记效率，反之亦然。

2、将反应混合物在室温下避光培养1小时。对于AT565-NHS和AT590-NHS，我们建议在环境温度下培养18小时以完成反应。

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