异硫氰酸荧光素（FITC）标记抗体流程

FITC（异硫氰酸荧光素）能够与各种抗体蛋白结合，同时不失去对特定抗原的特异性识别能力。一旦结合，抗体在碱性溶液中会表现出强烈的黄绿色荧光。通过在荧光显微镜下观察或使用流式细胞仪分析，可以进行对应抗原的定性、定位或定量检测。FITC在医学、农业和兽医学等多个领域被用于快速诊断由细菌、病毒、寄生虫和其他病原体引起的疾病。

艾美捷异硫氰酸荧光素相关参数：

产品编号：B-CHM100

规格：100毫克

存储条件：在避光的条件下，存放于-20°C。

分子式：C21H11NO5S

分子量：389.38

纯度：高于或等于95%（通过高效液相色谱法测定）

光谱特性：激发/发射波长 = 490 / 525 纳米

外观：黄色粉末

运输与储存

储存条件：在避光的条件下，存放于-20°C。稳定性：在适当的储存条件下，至少稳定12个月。

异硫氰酸荧光素标记抗体流程：

1. 将要进行交联的蛋白质（浓度为1 mg/mL）在4°C下对交联反应缓冲液进行三次透析，调整pH值至9.0。制备交联缓冲液：将7.56克碳酸氢钠、1.06克碳酸钠和7.36克氯化钠溶解在水中，最终体积为1升。

2. 将FITC在DMSO中溶解，浓度为1 mg/mL。为每次交联反应新鲜制备FITC溶液，并避免光照。

3. 以P:F（蛋白质：FITC）= 1 mg:150 μg的比例，缓慢地将FITC加入抗体溶液中。在加入FITC时轻轻搅拌溶液，以确保与抗体均匀混合。在4°C的暗处进行反应8小时。

4. 加入5 mol/L的氯化铵至最终浓度为50 mmol/L，以在4°C下停止反应2小时。

5. 将结合物对PBS溶液进行至少四次透析，直到透析液变清。

6. 交联材料的特征化：蛋白质浓度（mg/mL）= [A280 - 0.31 × A495] / 1.4；F/P比值：3.1 × A495 / [A280 - 0.31 × A495]。这个值应该在2.5 ~ 6.5之间。

7. 将FITC蛋白结合物在pH 7.4的PBS中保存，添加0.1%的亚硝酸钠和1%的牛血清白蛋白（BSA），在4°C的暗处保存。