异硫氰酸荧光素标记，高吸收、优良的荧光量子产率

异硫氰酸荧光素是生化试剂,也是医学诊断药物,主要用于荧光抗体技术中的荧光染料,能和各种抗体蛋白结合,结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性,并在碱性溶液中具有强烈的绿色荧光。用于医学,农学和畜牧等方面,可对由地细菌病毒和寄生虫等所致疾病进行快速诊断。

FITC，英文全称Fluorescein Isothiocyanate，中文名称异硫氰酸荧光素，具有高吸收率、优良的荧光量子产率和良好的水溶性等特点，是生物学中应用非常广泛的一种绿色荧光素衍生物，其异硫氰酸基团可与蛋白的氨基末端或者伯胺反应从而实现包括抗体，凝集素在内的蛋白标记。除了用作蛋白质标记物，还可用作蛋白质荧光示踪剂，标记抗体用以快速鉴定病原体，以及用于蛋白质和多肽（HPLC）的微量测序。FITC为黄-橙色粉末，最大激发波长为494 nm。一旦激发，在最大发射波长520 nm处呈黄-绿色荧光。

FITC有两种异构体，异构体I（Isomer I）和异构体II（Isomer II）,二者在光谱性质上基本没有差异（无论是波长还是光强度），但是前者更易纯化，所以相对便宜，应用也较为广泛。对于大部分应用，混合型的FITC已能很好的满足实验要求。本品纯度：≥95%，适合用于蛋白质标记。

艾美捷异硫氰酸荧光素：

Cat #: B-CHM100

规格：100 mg

储存：储存温度为-20°C，避光保存。

配方：C₂₁H₁₁NO₅S

兆瓦：389.38

纯度：≥95%（HPLC）

光谱特性：Ex/Em=490/525 nm

外观：黄色粉末

运输和储存：

储存条件：储存温度为20°C，避光。

稳定性：在适当的储存条件下稳定至少12个月。

异硫氰酸荧光素标记的抗体方案：

1、将待交联的蛋白质（浓度：1mg/mL）在交联反应缓冲液中在4°C下透析三次，将pH调节至9.0。交联缓冲液的制备：溶解7.56 g NaHCO3，1.06 g Na?CO3和7.36g NaCl在水中的溶液稀释至1L的最终体积。

2、将FITC以1 mg/mL的浓度溶解在二甲基亚砜中。为每次交联反应准备新鲜的FITC溶液，并避免暴露在光下。

3、将FITC缓慢添加到抗体溶液中，比例为P：F（蛋白质：FITC）=1 mg：150μg。轻轻混合溶液，同时加入FITC，以确保与抗体均匀混合。让反应在黑暗中在4℃下进行8小时。

4、添加5 mol/L NH?Cl最终浓度为50 mmol/L，在4°C下停止反应2小时。

5、将缀合物相对于PBS溶液透析至少四次，直到透析液变得清澈为止。

6、交联材料的特性：

蛋白质浓度（mg/mL）=[A280-0.31×A?gs]/1.4

F/P比：3.1×A?gs/[A280-0.31×A?gs]。该值应介于2.5～6.5之间。

7、将FITC蛋白偶联物储存在pH 7.4的PBS中，补充0.1%的NaN3和1%的BSA，在4°C的黑暗中储存。

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