Biogradetech PKH26红色荧光细胞链接试剂盒(外泌体染色)，多领域适用

PKH26细胞连接试剂盒（用于通用细胞膜标记）是一种基于荧光探针PKH26的测试试剂盒，用于通用细胞薄膜标记。它适用于体外细胞标记、体外细胞增殖和长期细胞追踪研究。PKH26是一种获得专利的具有长疏水性尾部的膜标记探针，可以稳定地插入细胞膜的肽区。PKH26荧光在黄橙色光谱范围内，最大激发波长为551nm，最大发射波长为567nm。它与罗丹明或PE检测系统兼容。它也可以用标准荧光素过滤器激发，但是荧光强度可能被轻微地降低。PKH26具有最长的体内半衰期，超过100天，非常适合体内细胞跟踪、细胞增殖研究和其他长期实验。此外，PKH26染料已在体外和体内跟踪实验中成功用于标记染色体和细胞外小泡。

艾美捷PKH26红色荧光细胞链接试剂盒(外泌体染色)基本参数：

目录号：B-CHK104

规格：0.1 mL

储存：室温

PKH26红色荧光细胞链接试剂盒(外泌体染色)一般细胞膜标记程序分析：

亲脂性染料结合到细胞膜上进行标记。染色强度是染料浓度和细胞浓度的函数，与渗透性无关。因此，确保适量的染料对于避免过度标记至关重要，这可能导致细胞膜完整性的丧失或细胞活力的降低。

以下程序可用于在体外和体内标记细胞，包括干细胞、淋巴细胞、单核细胞、内皮细胞、神经元或任何其他类型的细胞。体内细胞的标记过程可能需要进行某些修饰，如血小板染色或吞噬细胞的选择性标记。

在下面的染色过程中，细胞浓度和染料浓度表示该过程中使用的初始浓度。这些浓度已被证明适用于各种细胞类型。用户应根据实验目的，通过评估染色后细胞活力（如PI染色）、荧光强度、染色均匀性以及是否影响所研究细胞的功能，确定最佳染料浓度和细胞浓度。

注1：在PKH26染色过程中，不应存在叠氮化物或代谢毒性物质。

注2：虽然粘附细胞也可以染色，但单个悬浮细胞可以获得更好的染色均匀性。因此，对于粘附细胞，建议使用抑肽酶（胰蛋白酶/EDTA）将其消化成单个悬浮细胞，以获得更好的染色结果。

以下程序的最终体积为2 mL，PKH26浓度为2×10-6 M，细胞浓度为1×107个细胞/mL。以下所有步骤均在室温（20-25°C）下进行。

1.将含有2x107个单细胞的悬浮液置于锥形底部聚丙烯管中，并使用不含血清的培养基冲洗。注：血清蛋白质和脂质也会与染料结合，从而降低可用于膜粘合的有效浓度。在用DiluentC重悬用于标记（步骤4）之前，用无血清培养基或缓冲液洗涤一次（步骤1）可获得最佳结果。

2.将细胞（400x g）离心5分钟，形成松散的颗粒。注意：PKH26乙醇染料溶液不应直接添加到细胞沉淀中。这将导致异质性表达和细胞活力降低。

3.离心细胞后，仔细吸取上清液，注意不要去除任何细胞，而是留下25μL的上清液。注：为了获得可重复的结果，当细胞悬浮在稀释剂C中时，重要的是尽量减少残留培养基或缓冲液的量。

4.通过向细胞沉淀中加入1mL稀释剂C制备2x细胞悬浮液，并用温和移液管重悬以确保完全分散。不要涡旋，也不要让细胞长时间停留在稀释剂C中。注意：生理盐的存在会导致染料形成胶束，并大大降低染色效率。因此，重要的是在添加染料时将细胞悬浮在稀释剂C中，而不是悬浮在培养基或缓冲液中。

5.染色前，通过在聚丙烯离心管中向1 mL稀释剂C中加入4μL PHH26乙醇染料溶液，在稀释剂C中制备2倍染料溶液（4x10–6 M），并充分混合以分散。

注1：为了最大限度地减少乙醇对细胞活力的影响，步骤5中添加的染料体积应在步骤6结束时产生不超过1-2%的乙醇。

注2：如果需要最终染料浓度为2x10–6 M，则通过用未变性的100%乙醇稀释试剂盒中提供的PKH26乙醇染料溶液来制备中间染料原液，将获得最具重现性的结果。

6.将1mL的2x细胞悬浮液（步骤4）快速添加到1mL的2x染料溶液（步骤5）中，并立即通过移液管将样品挤出。混合指示体积后的最终浓度为1x107细胞/mL和2x10–6MPKH26

注：由于染色几乎是即时的，细胞在染料溶液中快速均匀的分散对于正确、均匀和可重复的标记至关重要。

该试剂仅用于科学研究领域，不适用于临床诊断或其他用途。

Biogradetech生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的供应商：Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。