Cytoskeleton热销产品Actin 细肌丝 （牛心脏）方案

心脏细丝复合物（CTFC）由纯化的F-肌动蛋白（货号#AD99）和原肌球蛋白/肌钙蛋白（TT）复合物（货号#TT05）组装而成。因此，CTFC由六种蛋白质组成：肌动蛋白：原肌球蛋白α?：原肌球蛋白β：肌钙蛋白C ：肌钙蛋白I ：肌钙蛋白T，化学计量比为7：1：1：1：1：1：1;参见图100。组装后，将细丝以000，<>×g离心，并将沉淀重悬于反应缓冲液中，以纯化钙敏感复合物。该复合物已被确定在钙激活肌球蛋白ATP酶测定中具有生物活性（参见生物活性测定）。该复合物以白色冻干粉末形式提供。   

作为Cytoskeleton全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Cytoskeleton热销产品Actin 细肌丝 （牛心脏）。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。   

Cytoskeleton公司目前主要的产品有340余种，其产品主要覆盖肌动蛋白，微管蛋白，马达蛋白，小G蛋白，细胞外基质，活细胞成像等相关领域，提供对应的蛋白质，抗体，检测与分析试剂盒，并且产品线还在不断的扩大中。

Actin 细肌丝 （牛心脏）用途：

钙激活肌球蛋白ATP酶活性与细丝结合时的测量。 

鉴定/表征影响CTFC调节和肌球蛋白ATP酶活性的蛋白质或小分子 

鉴定/表征影响肌球蛋白/F-肌动蛋白相互作用的蛋白质或小分子

例：心脏细丝复合物（CTFC）（货号# TFC01）由纯化的F-肌动蛋白（货号#AD99）和原肌球蛋白/肌钙蛋白（TT）复合物（货号#CS-TT05）组装而成。  

存储和共振

短暂离心以将产品收集到管底部。蛋白质应通过加入室温（RT）PM2缓冲液复溶至12mg / ml（缓冲液组成参见试剂部分）。不要用力移液，因为这会使细丝变性。将首先出现白色解决方案。放置10分钟，然后以500 x g 离心以除去气泡。解决方案现在应该看起来很清楚了。不要高速离心，因为细丝会沉淀。 重悬后，蛋白质将位于以下缓冲液中：16.8 mM PIPES pH 7.5、2.8 mM MgCl2 和 2% （w/v） 蔗糖。蛋白质溶液可以通过等分试样成“实验大小”的量来冷冻，在液氮中快速冷冻并储存在-70°C。 通过将蛋白质置于室温水浴中3min，然后放在工作台上来快速解冻。如果储存在-6°C，该蛋白质可稳定保存70个月。 蛋白质不应暴露于重复的冻融循环中。冻干蛋白在4°C干燥（<10%湿度）下稳定1年。  

纯度

蛋白质纯度通过在4-20%梯度聚丙烯酰胺凝胶上扫描考马斯蓝染色蛋白质的密度测定来确定。测定用于产生肌球蛋白S1片段的肌球蛋白及其轻链纯度为90%（见图2）。  

图2.全长和 S1 肌球蛋白

图例：在20-4%SDS-PAGE系统（泳道20）中通过电泳分离2 μgCTFC蛋白样品，并用考马斯蓝染色。分子量为43 kDa肌动蛋白，38 kDa肌钙蛋白T，32 kDa原肌球蛋白（α+β）?，24 kDa肌钙蛋白I和18 kDa肌钙蛋白C.使用精密红色?蛋白测定试剂（Cat.# ADV02）测量蛋白质浓度。见蓝色分子量标记（泳道1）来自Life Technologies Inc.。 

Actin 细肌丝 （牛心脏）生物活性测定：CTFC的生物活性可以通过其调节肌球蛋白ATP酶活性的能力来确定。CTFC重新创建类似于肌肉纤维细丝的涂层细丝。肌球蛋白以亚化学计量量加入，并用ATP和钙引发反应。严格的质量控制确保在没有外源性钙的情况下，CTFC完全抑制肌球蛋白ATP酶。加入10μM钙后，肌球蛋白ATP酶将恢复。钙与肌钙蛋白C结合，肌钙蛋白C与F-肌动蛋白解离，允许肌球蛋白结合。 

试剂

1.心脏细丝复合物（1 x 1 毫克，# TFC01） 

2.心脏肌球蛋白S1（0.25毫克，#MYS03） 

3.ATP酶测定生化试剂盒（货号#BK051） 

4.100 mM ATP 在 50 mM Tris-HCl pH 7.5 （100 μl） 

5.PM12反应缓冲液（12 mM管-NaOH，pH 7.5，2 mM MgCl 2）。  

Actin 细肌丝 （牛心脏）文献引用：

1. J.M Murray. 1982. Hybridization and reconstitution of the thin filament. Methods Enzymol. 85: 15-17. 

2. M.J. Holroyde et al. 1980. The calcium and magnesium binding sites on cardiac troponin their role in the regulation of myofibrillar adenosine triphosphatase. J. Biol. Chem. 255: 11688-11693.   

Cytoskeleton专注于生物化学和细胞过程研究中的纯化蛋白和便捷试剂盒开发与生产。公司提供药物筛选、信号转导、蛋白质转录后修饰（PTM）、细胞骨架研究相关的系列试剂盒和产品，尤其以细胞骨架相关研究见长，既能满足于样品较少的科学研究，也可以用于小规模筛选研究和高通量大规模筛选研究。此外，公司还提供微管蛋白，肌动蛋白，小G蛋白，GAPs，GEFs等现有产品的药物筛选服务。