APExBIO--MEK抑制剂：AZD6244（司美替尼）实验方案

AZD6244 是一种高效、选择性的 MEK1/2 抑制剂，对 MEK1 的 IC50 值为 14.1 nM。

AZD6244 是第二代 MEK1/2 抑制剂。在放射性测定中，AZD6244对纯化的MEK1显示出有效的抑制作用，而没有与ATP竞争。此外，它是一种选择性抑制剂，因为它对其他酪氨酸激酶（包括 MKK6、EGFR、ErbB2 和 B-Raf 等）没有明显的抑制作用。在细胞测定中，AZD6244抑制 ERK1/2 的磷酸化，ERK1/2 是 MEK1/2 的直接底物。IC50值为10.3nM。它还抑制 EGF 诱导的 A431 细胞中 ERK1/2 的磷酸化，但不抑制 ERK5 的磷酸化。由于 MEK 在细胞增殖中很重要，因此由 AZD6244 引起的 MEK1/2 阻断导致含有激活 B-Raf 和 Ras 突变的细胞系中的生长抑制，IC50 值范围为 59 至 473nM。此外，在HT-29异种移植模型和BxPC3胰腺肿瘤异种移植模型中，AZD6244的给药可以显着抑制肿瘤生长[1]。

艾美捷APExBIO--AZD6244（司美替尼）化学性质：

形态 固体

存储 在 -20°C 下储存

分子量 457.69

CAS号 606143-52-6

公式 C17H15溴化物4O3

溶解度 ≥22.88 mg/mL的DMSO溶液;不溶于H2O;不溶于EtOH

常用英文名称 6-（4-溴-2-氯苯胺基）-7-氟-N-（2-羟基乙氧基）-3-甲基苯并咪唑-5-甲酰胺

运输条件 小分子与蓝冰，修饰核苷酸与干冰。

一般提示 不建议长期存放该解决方案，请尽快用完。

APExBIO--AZD6244（司美替尼）细胞实验：

制备方法：该化合物在DMSO中的溶解度为>10 mM。获得更高浓度的一般提示：请在37°C下加热试管10分钟和/或在超声波浴中摇晃一会儿。储备溶液可在-20°C以下储存数月。

反应条件：3 μM，24 小时

应用：AZD6244对细胞生长的抑制是由可逆的 G1 期细胞周期停滞引起的。用DMSO或3μM AZD6244处理贴壁1205Lu细胞24小时或24小时，并在除去药物后再处理24小时。发现用AZD6244处理的细胞进入G1期细胞周期停滞，但在去除药物后重新进入S期。

APExBIO--AZD6244（司美替尼）动物实验：

动物模型：植入HT-29人结肠癌的裸鼠

剂型：口服，10、25、50 或 100 mg/kg，每天两次，持续 21 天

应用：AZD6244在所有测试剂量下均可有效抑制肿瘤生长。两个最高剂量组的肿瘤生长终点时间为36天，而载体对照组为18天。给药11天后，在10mg / kg的低剂量下抑制了55%的肿瘤生长，在100mg / kg的高剂量下抑制了70%。停止AZD6244给药后观察到肿瘤生长的恢复。在100mg / kg剂量组中，肿瘤再生显着延迟。

其他说明：请在室内测试所有化合物的溶解度，实际溶解度可能与理论值略有不同。这是由实验系统错误引起的，这是正常的。

参考文献：

[1] Yeh TC, Marsh V, Bernat BA, Ballard J, Colwell H, Evans RJ, Parry J, Smith D, Brandhuber BJ, Gross S, Marlow A, Hurley B, Lyssikatos J, Lee PA, Winkler JD, Koch K, Wallace E. Biological characterization of ARRY-142886 (AZD6244), a potent, highly selective mitogen-activated protein kinase kinase 1/2 inhibitor. Clin Cancer Res. 2007 Mar 1;13(5):1576-83.

引用文献：

1. Alain Aguilar-Valdes, Lilia G. Noriega, et al. "SWATH-MS proteomics of PANC-1 and MIA PaCa-2 pancreatic cancer cells allows identification of drug targets alternative to MEK and PI3K inhibition." Biochem Biophys Res Commun. 2021 Mar 16;552:23-29. PMID:33740661

2. Augustin Le Naour, Mélissa Prat, et al. "Tumor cells educate mesenchymal stromal cells to release chemoprotective and immunomodulatory factors." Journal of Molecular Cell Biology. 03 September 2019.

3. Bunda S, Heir P, et al. "CIC protein instability contributes to tumorigenesis in glioblastoma." Nat Commun. 2019 Feb 8;10(1):661. PMID:30737375

4. Khan IA, Yoo BH, et al. "Mek activity is required for ErbB2 expression in breast cancer cells detached from the extracellular matrix." Oncotarget. 2017 Oct 31;8(62):105383-105396. PMID:29285258

5. Sieber J, Wieder N, et al. "GDC-0879, a BRAF(V600E) Inhibitor, Protects Kidney Podocytes from Death." Cell Chem Biol. 2017 Dec 6. PMID:29249695

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