Agrisera Anti-Halo Tag，来源于Rhodococcus rhodochrous的DhaA的方案解析

HaloTag来源于红球菌的卤代烷脱卤酶DhaA，可以掺入感兴趣的蛋白质（POI），促进细胞和生化分析。HaloTag?是Promega Corporation的商标。

作为Agrisera全国总代理，艾美捷科技强烈推荐Agrisera热销产品Anti-Halo Tag，来源于Rhodococcus rhodochrous的DhaA。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

Anti-Halo Tag，来源于Rhodococcus rhodochrous的DhaA：

免疫原：来自红色诺卡氏菌（Rhodococcus rhodochrous）的DhaA，被称为HaloTag?的KLH偶联肽。

宿主：兔

克隆性：多克隆

纯度：抗原亲和纯化血清，在PBS pH 7.4中

格式：冻干

数量：50 微克

复溶：复溶时加入50 微升无菌或去离子水。

储存：冻干/复溶后储存于-20°C；一旦复溶，请分装以避免反复冻融。请记住，在打开管子前短暂离心以避免由于冻干物质粘附在管盖或管壁上而造成的任何损失。

测试应用：西方印迹（WB）

推荐稀释度：1:1000（WB）

确认反应性：带有HaloTag?的重组蛋白

预测反应性：带有HaloTag?的重组蛋白

样本：

1. 梯度（PageRuler Prestained, 10至180 kDa - Thermo）

2. 未诱导的细菌

3. 在37°C下诱导3小时的细菌

4. 超声裂解后（裂解液）上清液的分装

5. 与珠子孵育后的流穿

6. 用酸性洗脱缓冲液洗脱1次

7. 用酸性洗脱缓冲液洗脱2次

8. 用2倍SDS样品缓冲液洗脱珠子

重组蛋白是从25毫升在37°C下诱导3小时的大肠杆菌Rossetta细菌中纯化的。超声裂解培养物（裂解液）后，将Halo-Trap琼脂糖珠子（chromotek）加入上清液并在4°C下孵育1小时。经过3次洗涤后，用酸性缓冲液（x2）和50微升Laemmli 2X洗脱珠子。然后将样本在12% SDS-PAGE上分离，并湿转移至0.45微米孔径的硝酸纤维素上，转移时间为1小时。用5%牛奶封闭印迹2小时/室温下搅拌。用1:1000稀释的初级抗体在5%牛奶TBS-T中过夜/4°C下搅拌。倒掉抗体溶液后，用TBS-T在室温下搅拌4次，每次5分钟。用二级抗体（AS09 602，兔抗鼠IgG，HRP偶联）稀释至1:20000，在5%牛奶中1小时/室温下搅拌。如上所述洗涤印迹，并用AS16 ECL-S-10，AgriSeraBright化学发光检测试剂显影。曝光时间为30秒。

感谢法国IBPS种子生物学队的Paul Schouvelier

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