PDF1(植物防御素1)对病原体具有广谱抗性,并具有抗真菌活性。替代名称:花药特异性蛋白S18同源物、富含半胱氨酸的抗真菌蛋白1、AFP1、低分子量富含半胱氨酸的蛋白67、蛋白LCR67。
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抗PDF 1|植物防御素1.1 | AS16-3973 | 查看 |
抗PDF 1|植物防御素1.1:
免疫原:
与KLH共轭的合成肽,源自拟南芥PDF1.1蛋白序列,UniProt: P30224-1, TAIR: At1g75830。
该肽序列在以下拟南芥亚型中完全保守:PDF1.2c、PDF1.2b、PDF1.2A、PDF1.3。PDF2亚型序列在BLAST中未找到。
宿主:兔
克隆性:多克隆
纯度:在PBS pH 7.4中的亲和纯化血清
格式:冻干粉
数量:50微克
复溶:复溶时加入50微升无菌水。
储存:将冻干粉/复溶后的抗体存储在-20°C;一旦复溶,请分装以避免反复冻融。请在使用前短暂离心管,以避免由于冻干物质粘附在管盖或管壁上而造成的任何损失。
测试应用:西方印迹(WB)
推荐稀释度:
1:1000(WB)
预期/表观分子量:8.7千道尔顿
确认的反应性:拟南芥,番茄
预测的反应性:拟南芥,甘蓝型油菜,金缕梅,荠菜,高粱属。
样品:
使用的标记是Euroclone公司的预染色蛋白SHARPMASS?VI蛋白MW标记(5-245 kDa)。
样品1:感染灰霉病菌后0小时,从野生型叶片中提取40?g拟南芥总蛋白(阴性对照);
样品2:40?g来自突变叶片的拟南芥总蛋白(诱导PDF1 mRNA表达),感染灰霉病菌后0小时(阳性对照);
样品3:40?g野生型拟南芥叶片在感染灰霉病菌24小时后的总蛋白(阳性对照,PDF1预计由实验中使用的病原体诱导);
样品4:40?g来自灰霉病菌感染后24小时突变叶片(诱导PDF1 mRNA表达)的拟南芥总蛋白(阳性对照);
样品“-”,10?g在黑暗条件下生长的拟南芥总蛋白野生型幼苗(阴性对照)
用提取缓冲液(125 mm Tris,pH 6.8,4%[w/v]SDS,20%[v/v]甘油,0.02%[w/v]溴酚蓝,10%[v/v]β-巯基乙醇)从拟南芥6周大的叶子中新鲜提取高达40?g/孔的总蛋白,并在95°C下变性7分钟,在4-20%Mini-PROTEAN?TGX?预制蛋白凝胶(biorad)SDS-PAGE上分离,并使用Trans-Blot Turbo Transfer System(Bio-Rad)在PVDF(孔径0.2?m)上印迹1小时。在搅拌下用5%牛奶阻断印迹1小时/RT。将印迹在稀释度为1:1000的第一抗体中孵育过夜(约16小时),在PBS-T中搅拌,搅拌温度为+4°C。倾析抗体溶液,将印迹短暂冲洗两次,然后在室温下在PBS-T中搅拌洗涤一次15分钟和三次5分钟。在搅拌下,将印迹在稀释至1:10000的Agrisera匹配的第二抗体(抗兔IgG辣根过氧化物酶偶联)中孵育2h/RT。如上所述洗涤印迹,并用Agrisera ECL SuperBright with ChemiDoc Imaging Systems(Bio-Rad)显影3分钟。曝光时间为10秒。
左膜:蛋白质印迹检测。右膜:染色。
意大利罗马大学Sapienza分校Ricardo Lorrani博士提供
文献参考:
Nikoloudakis et al. (2020). Structural Diversity and Highly Specific Host-Pathogen Transcriptional Regulation of Defensin Genes Is Revealed in Tomato. Int J Mol Sci. 2020 Dec 9;21(24):9380. doi: 10.3390/ijms21249380. PMID: 33317090; PMCID: PMC7764197.
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