Jena Bioscience 3 '-末端寡核苷酸标记试剂盒在分子生物学中的应用

3'-末端寡核苷酸标记试剂盒包含了进行DNA寡核苷酸（长度：20 - 100 bp，每反应5 pmol）高效3'-末端标记所需的所有缓冲液和试剂，唯独不包括待标记的寡核苷酸模板和标记核苷酸。标记原理基于末端脱氧核苷酸转移酶（TdT），它能在CoCl2存在的条件下，非依赖模板地将标记核苷酸转移到单链DNA（例如一个寡核苷酸）的3'-OH基团上。核苷酸的数量，从而标记的结合，取决于核苷酸的类型（UTP/ddUTP）以及标记的类型。标记的UTP：平均1至3个标记；标记的dUTP：多重标记（尾部长度高度依赖于核苷酸特异性）；标记的ddUTPs：1个标记。所得的3'-末端标记寡核苷酸非常适合用于涉及序列特异性蛋白结合或杂交的应用，如电泳迁移率变化分析（EMSA）、Northern或Southern印迹。与内部随机标记的探针相比，标记仅位于3'-末端，不太可能干扰探针的结合。TdT对单链DNA（ssDNA）有偏好，相对于具有3'-悬垂或平端的双链DNA（dsDNA）。为了制备标记的dsDNA复合物，应分别标记每个互补的寡核苷酸，并在使用前退火它们。

作为Jena Bioscience在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐Jena Bioscience 3 '-末端寡核苷酸标记试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

组成：

末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）：

- TdT酶：30 μl（每μl含20 U），溶于100 mM醋酸钾（pH 6.8）、2 mM 2-巯基乙醇、0.01% Triton X-100（体积比）以及50%甘油（体积比）。

- 5倍TdT反应缓冲液：400 μl，包含1 M醋酸钾肼（pH 7.2）、0.125 M Tris、0.05% Triton X-100（体积比）、5 mM氯化钴（CoCl?）。

- 未标记对照寡核苷酸（60 bp）：250 μl，1 μM，溶于1倍TE缓冲液，pH 7.6。

- PCR级水：12.5 ml。

- 1倍TE缓冲液，pH 7.6：100 ml，包含10 mM Tris-HCl和1 mM EDTA。

- 终止缓冲液：400 μl，0.5 M EDTA溶液，pH 8。

运输：放置在凝胶包装中运输。

储存条件：存储于-20°C。

附加储存条件：避免冻融循环。

保质期：12个月。

1. 3' 末端寡核苷酸标记反应

- 除了TdT之外，将所有组分存放在冰上直至使用。

- 将TdT存放在-20°C直至使用。

- 最终测定体积：50 ?l

- 模板要求：通过HPLC或凝胶电泳纯化的寡核苷酸/单链DNA，长度为20 – 100 bp。

- 按照下面列出的顺序在冰上添加所有组分。

- 通过轻轻上下吸液的方式混合反应，不要涡旋混合！

- 在37°C下孵育30分钟。

- 添加1 ?l终止缓冲液（0.5 M EDTA溶液，pH 8）以停止每个反应。

- 将反应存放在冰上以备后续使用（见3.）或在-20°C下长期保存。

Jena Bioscience的主要产品包括核苷/核酸制品系列（包括合成的类似物）、重组蛋白及蛋白表达系统、点击化学产品系列、在结构学研究方面全面提供晶体筛选试剂盒、优化试剂、工具和各类耗材等。此外，还提供分子生物学和生物化学研究的定制试剂与研究服务。

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