含地高辛-11-ddUTP的DIG 3'-末端寡核苷酸标记试剂盒包含DNA寡核苷酸有效3'-末端地高辛化所需的所有试剂(待标记的寡核苷酸模板和地高辛检测材料除外)(长度:20-100bp,每次反应5pmol)。标记原理基于末端脱氧核苷酸转移酶(TdT),其在CoCl2存在下模板独立地将1Digoxigenin-11-ddUTP转移到ssDNA的3'-OH基团(例如寡核苷酸)。它和第二代(罗氏)DIG寡核苷酸3'-末端DNA标记试剂盒的原理相似。所得到的3’-末端脱氧寡核苷酸非常适合涉及序列特异性蛋白质结合或杂交的应用,如EMSA、Northern或Southern印迹。与内部随机的地高辛化探针相比,地高辛仅位于3'-端,不太可能干扰探针结合。TdT优先选择单链DNA(ssDNA),而不是具有3’-悬垂或钝端的dsDNA。为了制备标记的dsDNA复合物,分别标记每个互补的寡核苷酸,并在使用前对其进行退火
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地高辛配基-11-ddUTP标记DIG 3 '-末端寡核苷酸试剂盒 | APP-002 | 查看 |
组成:
末端脱氧核苷酸转移酶(Tdt)
30μl(20 U/μl)溶于100 mM乙酸钾(pH 6.8)中,2 mM 2-
巯基乙醇、0.01%Triton X-100(v/v)和50%甘油(v/v
5x TdT反应缓冲液
400μl,含1M二碳酸钾、0.125M Tris、0.05%TritonX-100(v/v)、5mM CoCl?,pH 72
地高辛-11-ddUTP25μl(1mM)
未标记对照寡核苷酸(60 bp)250μl,1μM,1x TE缓冲液,pH Z.6
3'-地高辛标记的对照寡核苷酸(60 bp)130μl,1μM,在1x TE缓冲液中,pH Z.6
PCR等级H?O
12.5毫升
1x TE缓冲液,pH 76100 ml,含有10 mM Tris-HCl、1 mM EDTA,pH 7.6
停止缓冲区
400μl,0.5 M EDTA溶液,pH 8
运输:用凝胶包装运输
储存条件:在-20°C下储存
其他储存条件:避免冷冻/解冻循环
保质期:12个月
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