AIFM1(Ser-116),磷酸特异性：蛋白质磷酸化的新突破点

凋亡诱导因子（AIFM1，AIF，PDCD8）是一种广泛表达的黄素蛋白，对非半胱天冬酶依赖性凋亡起关键作用。AIFM1在表达时为一个66 kDa的前体蛋白，然后经N-末端剪切成62 kDa，并定位于线粒体内膜间隙。在凋亡刺激下，AIFM1以57 kDa的片段形式从线粒体内膜释放出来，并可以转位到细胞核。用重组AIFM1处理分离的细胞核会引发早期凋亡事件，如染色质凝聚和大规模DNA断裂。对AIFM1敲除小鼠的研究表明，AIFM1的凋亡活性是细胞类型和刺激因素依赖的。AIFM1已被认为参与了一种由氧化应激引起的非炎症性、非半胱天冬酶依赖性的细胞死亡途径，称为氧化性细胞死亡（oxeiptosis）。在oxeiptosis过程中，增加的活性氧物质导致磷酸酶PGAM5从KEAP1中释放出来，进而使AIFM1（Ser-116）去磷酸化并引发细胞死亡。因此，AIFM1在Ser-116位点的磷酸化状态可能是涉及oxeiptosis的细胞死亡的重要标志。

未处理（泳道1和3）或用calyculin A处理（100nM，30min）（泳道2和4）的人jurkat细胞的蛋白质印迹图像。用1:500的拉比多克隆抗AIFM1（C末端区）（泳道1和2）和1:1000的抗AIFM-1（Ser-116）磷酸特异性抗体（泳道3和4）探测印迹。

艾美捷AIFM1(Ser-116),磷酸特异性（AP5501）：

在用磷酸化AIFM1（Ser-116）肽进行亲和纯化之前，该抗体经过与未磷酸化的AIFM1（Ser-116）肽交叉吸附。该抗体可以在经过卡库林A处理的人类Jurkat细胞的SDS-PAGE免疫印迹中检测到一个三重带，分子量为66、62和57 kDa*。经过λ磷酸酶处理去磷酸化的AIFM1后，不再观察到这种反应。*所有分子量（MW）均通过与Bio-Rad彩虹标记物的比较以及与已知分子量相似的蛋白质的免疫印迹迁移性进行确认。

对应于人类AIFM1中Ser-116周围的氨基酸，合成了磷酸化AIFM1（Ser-116）合成肽（与载体偶联）。这个位点在大鼠和小鼠的AIFM1中是保守的，但是周围的氨基酸序列并不保守。在AIFM2和AIFM3中没有发现这个位点。

缓冲液和储存：兔多克隆亲和纯化抗体提供100?l磷酸盐缓冲盐溶液、50%甘油、1 mg/ml牛血清白蛋白和0.05%亚硝酸钠。储存在-20°C。稳定保存一年。

AIFM1(Ser-116),磷酸特异性相关研究：

BK6950 Bad Phospho-Regulation Antibody Sampler Kit

BP5111 Bcl-x Rabbit Polyclonal

CK6360 Caspase Family Antibody Sampler Kit

CM3771 Caspase-3 (N-terminal region) Mouse Monoclonal

CM4911 Caspase-3 (p17 subunit) Mouse Monoclonal

AIFM1(Ser-116),磷酸特异性参考文献：

Daugas, E. et al. (2000) FEBS Lett. 476:118.

Lipton, S.A. and Bossy-Wetzel, E. (2002) Cell 111:147.

Delavallee, L. et al. (2011) IUBMB Life. 63(4):221.

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