ALPCO高灵敏度促甲状腺激素(大鼠)ELISA(96孔)检测方案

甲状腺刺激激素（也称为促甲状腺激素或TSH）是由前脑垂体腺产生的糖蛋白。它通过作用于甲状腺，维持碘甲状腺原氨酸T4和T3的正常循环水平，从而发挥重要作用。TSH的产生和分泌一方面受到循环中的T4和T3的负反馈控制，另一方面受到下丘脑促甲状腺激素释放激素（TRH）的控制。TSH分子由两个非相同的亚单位α和β组成，它们以非共价方式结合在一起。在同种物种内，TSH α单位在结构上与相关糖蛋白激素（LH、FSH）的α亚单位相同。相关激素的β亚单位在结构上是激素特异性的，因此决定了它们独特的生物活性。控制大鼠甲状腺功能的机制与人类机制完全类似。这意味着促甲状腺激素释放激素刺激垂体腺释放TSH以及影响垂体腺作用的T4和T3的血清浓度。大鼠和人类甲状腺生理之间的这种相似性使得大鼠成为评估新药对甲状腺代谢状态影响的非常有用的模型。

艾美捷促甲状腺激素(大鼠)ELISA(96孔)（ALP-55-TSHRT-E01）检测原理：

该试剂盒是一种固相酶联免疫吸附测定（ELISA），采用微孔板格式，设计用于定量测量大鼠血清中的TSH。微孔板涂有特异性针对TSH的单克隆抗体。校准品和样本被移液到包被有抗体的微孔板中。然后加入多克隆辣根过氧化物酶标记的抗体。在4-8°C下孵育16-24小时期间，由两种抗体和大鼠TSH组成的三明治复合物形成。通过洗涤步骤去除非反应性组分。向所有孔中添加一种显色底物TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。在30分钟孵育期间，底物被固定酶转化为有色终产品（蓝色）。通过添加盐酸作为停止溶液（由蓝变黄）来停止酶反应。颜色强度与样本中存在的大鼠TSH浓度成正比。使用微孔板读取器在450纳米处测量颜色溶液的光密度。

一般说明：

1所有试剂和样本在使用前必须放置至室温。所有试剂混合时必须避免产生泡沫。

2一旦测试开始，所有步骤都应无中断地完成。

3为避免交叉污染，每个标准品和样本使用新的一次性塑料移液管头。

4吸光度是孵育时间和温度的函数。开始测定前，建议所有试剂准备就绪，移除盖子，所有需要的孔固定在支架中等。这将确保每个移液步骤在无中断的情况下有相等的经过时间。

5作为一般规则，酶促反应与时间和温度成线性关系。

6应遵循推荐的孵育时间。

7微孔板洗涤很重要。洗涤不当的孔会产生错误的结果。建议使用多通道移液管或多步移液管，或自动微孔板洗涤系统。不要在孵育之间让孔干燥。在冲洗和抽吸过程中不要刮伤包被孔。仔细冲洗和填充所有试剂。在冲洗时，检查所有孔是否精确填充了洗涤溶液，孔中是否有残留物。

8建议对校准品、对照品和样本进行双重测定，以识别可能的移液错误。

9每次运行都必须建立校准曲线。

促甲状腺激素(大鼠)ELISA(96孔)结果计算：

1. 计算每组校准品、对照品和样本的平均吸光度值。

2. 通过将每个校准品的平均吸光度与其浓度作图，构建标准曲线，吸光度值在垂直（Y）轴上，浓度在水平（X）轴上。

3. 使用每个样本的平均吸光度值，从校准曲线上确定相应的浓度。

4. 自动方法：IFU中的结果已使用4-PL（4参数逻辑）曲线拟合自动计算。4参数逻辑是首选的计算方法。其他数据简化功能可能会给出略有不同的值。

5. 样本的浓度可以直接从标准曲线上确定。浓度高于最高校准品的样本必须进一步稀释。在计算浓度时，必须考虑这个稀释因子。

典型校准曲线示例：

以下数据仅供说明之用，不应用来计算另一次运行的结果。

结果的可靠性：

测定必须严格按照使用说明进行。此外，用户必须严格遵守良好实验室规范（GLP）或其他适用的国家标准和/或法律。这对于使用控制试剂尤为重要。在测试程序中始终包含足够数量的对照品以验证测定的准确性和精确性是很重要的。只有当所有对照品都在指定范围内，且所有其他测试参数也都在给定的测定规格内时，测试结果才有效。