睾酮是一种由男性睾丸中的Leydig细胞、女性卵巢以及两性肾上腺皮质合成的雄激素类固醇激素。它对性行为、肌肉质量、力量、能量、心血管健康和骨骼完整性有着广泛的影响。
睾酮的生物合成与雄性大鼠的精子发生和胎儿Leydig细胞分化相一致。为了研究睾酮对精子发生的激素调控,建立了包括激素抑制、激素恢复和垂体切除在内的几种体内模型(1-3)。在棕挪威大鼠中,随着年龄的增长,血清睾酮水平下降,同时血清FSH水平上升。Leydig细胞产生睾酮的能力在年轻大鼠中比在老年大鼠中更高(4)。在妊娠晚期和新生儿期分泌的睾酮会导致大鼠大脑性别二态性显著差异。这导致了成年后性别特异性的行为和内分泌学特征(5)。
关于合成调控的分析表明,睾酮能够调节自身的合成,并表明这种自我调节是睾酮通过快速、特异性抑制17-α羟化酶活性的结果(6)。
作为ALPCO在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品睾酮(小鼠/大鼠)ELISA, 96孔。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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睾酮(小鼠/大鼠)ELISA, 96孔 | ALP-55-TESMS-E01 | 查看 |
睾酮(小鼠/大鼠)ELISA, 96孔检测原理:
小鼠/大鼠睾酮ELISA试剂盒是一种固相酶联免疫吸附试验(ELISA),基于竞争性结合原理。未知量的睾酮样品中存在一定量的与辣根结合的睾酮过氧化物酶竞争包裹在a孔上的睾酮抗血清的结合位点微孔板。孵育一小时后,洗掉未结合的结合物结合的过氧化物酶偶联物与体内睾酮的浓度成反比样品。加入底物溶液后,显色强度呈反比与样品中睾酮的浓度成比例。酶促反应是通过添加停止溶液(从蓝色变为黄色)停止,光密度(OD)为仔细斟酌的。通过绘制OD值与以下物质浓度的关系图来构建标准曲线使用该标准曲线确定未知样品的浓度。
警告和注意事项
1. 仅限研究使用。
2. 使用和处理血液成分和生物材料时,应视为潜在危险物。处理和处置潜在传染性物质时,遵循通用预防措施。
3. 开始实验前,仔细阅读并完全理解说明书。使用试剂盒中提供的有效的说明书版本。确保一切都被理解。
4. 微孔板包含可拆卸的条带。未使用的孔必须存放在密封的铝箔袋中,并在提供的框架内使用,存放在2-8°C。
5. 必须尽快并以相同的顺序进行样本和试剂的移液操作。
6. 仅使用储液池存放单一试剂。这特别适用于底物储液池。使用一个储液池分装之前用于结合物溶液的底物溶液可能会导致溶液变色。不要将试剂倒回瓶中,以免污染。
7. 彻底混合微孔板孔内的内容物,以确保良好的测试结果。不要重复使用微孔。
8. 在实验过程中不要让孔干燥;完成冲洗步骤后立即添加试剂。
9. 所有试剂在使用前应置于室温(18-25°C)。温度会影响实验的吸光度读数。
10. 切勿用口吸液,避免试剂和样本与皮肤和粘膜接触。
11. 在处理样本或试剂的区域不要吸烟、进食、饮水或化妆。
12. 处理样本和试剂时佩戴一次性乳胶手套。试剂或样本的微生物污染可能会导致假结果。
13. 应按照适当的国家生物危害安全指南或法规定义的程序进行操作。
14. 不要使用试剂盒标签上显示的过期日期之后的试剂。
15. 必须根据协议执行所有指示的体积。只有在使用校准的移液器和微孔板读数器时,才能获得最佳的测试结果。
16. 不要混合或使用不同批号试剂盒的组分。不建议即使同一批次的不同板之间也不要交换孔。试剂盒可能在不同的条件下运输或储存,板的结合特性可能会产生略有不同的结果。
17. 避免接触终止液。它可能会引起皮肤刺激和灼伤。
18. 一些试剂含有Proclin 300、CMIT和/或MIT作为防腐剂。如果接触到眼睛或皮肤,请立即用水冲洗。
19. 化学品和制备或使用的试剂必须根据国家生物危害安全指南或法规作为危险废物处理。
20. 有关更多信息,请参考安全数据表。该产品的安全数据表可在ALCO的网站上查阅或应要求提供。
文献参考:
1. Huang HF, Marshall GR, Rosenberg R & Nieschlag E (1987): Restoration of spermatogenesis by high levels of testosterone in hypophysectomised rats after long-term regression. Acta Endocrinologica 116, 433–444.
2. Sun YT, Irby DC, Robertson DM & de Kretser DM (1989): The effects of exogenously administered testosterone on spermatogenesis in intact and hypophysectomized rats.
Endocrinology 125, 1000– 1010.
3. O’Donnell L, McLachlan RI, Wreford NG & Robertson DM (1994): Testosterone promotes the conversion of round spermatids between stages VII and VIII of the rat spermatogenic cycle. Endocrinology 135 2608–2614.
4. Zirkin BR & Chen H. (2000): Regulation of Leydig cell steroidogenic function during aging.Biol. Reprod. 63(4): 977-81
5. Sakuma Y (2009): Gonadal steroid action and brain sex differentiation in the rat. J.Neuroendocrinol. 21 (4): 410-4
6. Darney KJ Jr, Zirkin BR, Ewing LL (1996): Testosterone autoregulation of its biosynthesis in the rat testis: inhibition of 17 alpha-hydroxylase activity. J. Androl. 17 (2): 137-42
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