ALPCO 雌二醇大鼠ELISA, 96孔，精确追踪大鼠雌二醇变化

雌二醇（E2或17β-雌二醇）是由卵巢产生的一种雌性激素，肾上腺皮质和睾丸也会产生少量。它是最有效的女性性激素，对于维持正常的女性功能至关重要。在发情周期中，该周期可以分为四个阶段（前发情期、发情期、间情期、休情期），雌二醇浓度从间情期逐渐上升至前发情期，在发情期降至几乎无法检测的水平。前发情期的中午时分达到最大浓度（1,2）。除了对性特征的影响外，它对大脑的生长和发育也有重要影响（3,4）。在雌性啮齿动物中，雌二醇的测定是评估和监测生殖功能和妊娠状态的有用标志。

雌二醇大鼠ELISA是一种竞争性免疫分析，用于大鼠血清中雌二醇的定量测量。仅供研究使用。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品雌二醇大鼠ELISA, 96孔。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

雌二醇大鼠ELISA, 96孔检测原理：

雌二醇大鼠ELISA试剂盒是一种基于竞争性结合原理的固相酶联免疫吸附试验（ELISA）。微量滴定孔涂有抗雌二醇抗体。样品中存在的未知量的雌二醇与雌二醇-辣根过氧化物酶偶联物竞争与包被抗体的结合。孵育后，未结合的结合物被洗掉。结合的过氧化物酶结合物的量与样品中雌二醇的浓度成反比。加入底物溶液后，显色强度与样品中游离雌二醇的浓度成反比。

一般说明

? 使用前必须让所有试剂和样本达到室温。所有试剂混合时不得产生泡沫。

? 一旦开始测试，所有步骤都应连续完成，不得中断。

? 为避免交叉污染，每个标准品、对照品或样本都应使用新的一次性塑料移液器枪头。

? 吸光度是孵育时间和温度的函数。开始检测前，建议所有试剂准备就绪，移除盖子，所有需要的孔位固定在支架中等。这将确保每个移液步骤的间隔时间相等，且无中断。

? 作为一般规则，酶促反应与时间和温度成正比。

? 严格遵守本使用说明书中规定的孵育时间。

? 建议对校准品、对照品和样本进行双重测定，以识别可能的移液错误。

? 每次运行都必须建立标准曲线。

? 微孔板洗涤很重要。洗涤不当的孔会产生错误的结果。建议使用多通道移液器或多步移液器，或自动微孔板洗涤系统。在孵育之间不要让孔干燥。在冲洗和抽吸过程中不要刮伤包被的孔。仔细冲洗和填充所有试剂。在冲洗时，检查所有孔是否都精确地填充了洗涤液，孔中是否有残留物。

检测程序

1. 准备足够数量的微孔板孔，以容纳双重测定的标准品和样本。

2. 使用新的一次性枪头，向相应的孔中分配75 ?L的每个校准品和样本。

3. 向每个孔中分配50 ?L的孵育缓冲液。

4. 在室温（18-25°C）下，在板式摇床上（900转/分钟）孵育120分钟。重要说明：此检测中的最佳反应明显依赖于微孔板的摇动！

5. 使用前，将酶结合物浓缩物以1:100的比例稀释于酶结合物稀释液中。向每个孔中加入50 ?L稀释后的酶结合物。

6. 在室温（18-25°C）下，在板式摇床上（900转/分钟）孵育60分钟。重要说明：此检测中的最佳反应明显依赖于微孔板的摇动！

7. 丢弃孔中的内容物，并用稀释的洗涤液（每个孔300?L）冲洗孔4次。通过将微孔板轻敲在吸水纸上，尽可能去除洗涤液。

8. 向每个孔中加入200 ?L的底物溶液。

9. 在黑暗中不摇动孵育30分钟。

10. 通过向每个孔中加入50 ?L的停止液来终止反应。

11. 测定每个孔在450 nm处的吸光度。建议在加入停止液后15分钟内读取孔的吸光度。

文献参考：

1. Abubakar A. Shaikh. Estrone and estradiol levels in the ovarian venous blood from rat duringthe estrous cycle and pregnancy; Biology of Reproduction (1971); 5, 297 - 307.

2. Hawkins, R.A, Freedman, A., Marshall, A., Killen, E. Oestradiol-17β and prolactin levels in ratperipheral plasma; Br. J. Cancer (1975); 32, 179.

3. Zamani, M.R, Desmond, N.L, Levy, W.B.. Estradiol modulates long term synaptic depression infemale rat hippocampus. J. Neurophysiol (2000); 84: 1800 - 1808.

4. McCarthy, M.M. Estradiol and the developing brain; Physiol. Rev. (2008); 88: 91-134.

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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