IgG检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法(ELISA),用于定量猴血浆和血清样本中免疫球蛋白G(IgG)的测定。用于研究仅限使用。不用于诊断程序。
作为ALPCO在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品猴子IgG ELISA试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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猴子IgG ELISA试剂盒 | ALP-41-IGGMK-E01 | 查看 |
猴子IgG ELISA试剂盒检测原理:
双抗体夹心ELISA的原理如图1所示。在此检测中,样品中的IgG与已吸附在聚苯乙烯微量滴定孔表面的抗IgG抗体发生反应。去除未结合的蛋白质后,加入与辣根过氧化物酶(HRP)结合的抗IgG抗体。这些酶标记的抗体与先前结合的IgG形成复合物。在另一步洗涤后,通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)来测定结合到免疫吸附剂上的酶。结合的酶的数量与被测试样品中IgG的浓度成正比;因此,在450 nm处的吸光度可以作为被测试样品中IgG浓度的测量。测试样品中IgG的数量可以通过从标准曲线中推算得到,该标准曲线是根据标准品构建并校正样品稀释度得出的。
所需材料但未提供
精密移液器(2 ?L至1000 ?L),用于稀释和分配。
试管。
喷瓶或微孔板清洗/吸液器。
蒸馏水或去离子水。
微孔板读数仪。
各种玻璃器皿,用于制备试剂和缓冲溶液。
定时器。
抗凝剂(用于血浆样本收集)。
离心机。
样本收集和处理
所有血液成分和生物材料应视为潜在危险物质。处理和处置时应遵循通用预防措施。
如果血样发生了凝块、严重溶血、脂血症,或样本的完整性受到怀疑,请记录并谨慎解读结果。
下面列出的样本收集和储存条件仅作为一般指导。样本稳定性尚未评估。
血清样本:应通过静脉穿刺收集血液。血液凝固后,通过离心分离血清与细胞。去除血清后立即检测,或分装并在-80°C(优先)或-20°C下储存。避免反复冻融循环。
血浆样本:应将血液收集到含有抗凝剂的容器中,然后进行离心。立即检测,或分装并在-80°C(优先)或-20°C下储存。避免反复冻融循环。
已知干扰物质:浓度高于0.1%的叠氮和硫柳汞会抑制酶反应。
样本稀释
检测要求在使用前对每个测试样本进行稀释。每次进行检测时,应对所有样本进行重复检测。推荐的稀释倍数仅供参考。稀释应基于未知样本的预期浓度,以确保稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本值,强烈建议在测试整个板之前对一个或两个代表性样本进行系列稀释检测。
血清和血浆样本 - 推荐的起始稀释倍数为1:80,000。要制备1:80,000的稀释液,将2 ?L的样本转移到1,998 ?L的1X稀释液中,这样得到1:1,000的稀释液。接下来,将1:1,000的稀释液通过将10 ?L转移到790 ?L的1X稀释液中,再稀释,得到1:80,000的稀释液。每个阶段都要彻底混合。
试剂准备
使用前,将所有试剂置于室温(16°C至25°C)。
稀释液浓缩液 - 提供的稀释液为5X浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水稀释1:5(1份缓冲浓缩液,4份去离子水)。
清洗溶液浓缩液 - 提供的清洗溶液为20X浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水稀释1:20(1份缓冲浓缩液,19份去离子水)。存储温度过低时,浓缩液中可能会出现结晶。在稀释之前,将浓缩液加热到30-35°C可以溶解结晶。
酶-抗体结合物 - 通过将10 ?L酶-抗体结合物加入990 ?L的1X稀释液中,为每个微孔板测试条计算所需的工作结合物溶液量。使用前立即稀释,并避免光照。均匀混合,但要轻柔,避免起泡。
预涂ELISA微孔板 - 可直接使用。撕开铝箔袋并从袋中取出板。去除所有不在检测中的条和孔,并将其放回袋中,重新封口并与干燥剂一起保存。
IgG标准品 - 根据特定批次的分析证书准备。
ALPCO产品种类多样,可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等,涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域,尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。
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