ALPCO 小鼠IgG2c ELISA试剂盒样本稀释和试剂准备说明

IgG2c检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于小鼠血浆和血清样本中IgG2c的定量测定。仅供研究使用。不用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品小鼠IgG2c ELISA试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

小鼠IgG2c ELISA试剂盒检测原理：

双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）的原理如图1所示。在这个检测中，样本中存在的IgG2c与已经吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgG2c抗体发生反应。洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗IgG2c抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的IgG2c形成复合物。经过另一次洗涤步骤，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来检测与免疫吸附剂结合的酶。结合酶的量与被测试样本中IgG2c的浓度成正比；因此，450纳米处的吸光度是测试样本中IgG2c浓度的量度。测试样本中的IgG2c量可以通过从标准品构建的标准曲线进行插值，并根据样本稀释进行校正。

未提供但必需的材料

精密移液管（2 ?L至1000 ?L）用于制作和分发稀释液

试管

喷雾瓶或微孔板洗涤/抽吸器

蒸馏水或去离子水

微孔板读数器

用于准备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿

计时器

抗凝剂（用于血浆样本收集）

离心机

样本收集和处理

所有血液成分和生物材料应视为潜在危险物品。在处理和处置时遵循通用预防措施。

如果血液样本出现凝血、严重溶血、脂血，或样本的完整性受到关注，应做记录并谨慎解释结果。

下面列出的样本收集和储存条件是作为一般指导方针。样本的稳定性尚未评估。

血清样本：应通过静脉穿刺收集血液。血液凝固后通过离心分离血清。移除血清并立即进行检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

血浆样本：应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即进行检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

已知干扰物质：叠氮化物和硫柳汞在高于0.1%的浓度下会抑制酶反应。

样本稀释

检测要求在使用前对每个测试样本进行稀释。每次进行检测时，所有样本都应以双份进行检测。推荐的稀释比例仅供参考。稀释比例应基于未知样本的预期浓度，以便稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本值，在运行整个板之前，强烈建议对一个或两个代表性样本进行连续稀释。

血清和血浆样本 - 推荐的起始稀释比例为1:5,000。要准备1:5,000的样本稀释液，将5 ?L的样本转移到495 ?L的1X稀释液中。这会产生1:100的稀释液。接下来，将1:100的稀释液通过转移10 ?L到490 ?L的1X稀释液中进行稀释。这会产生1:5,000的稀释液。每个阶段都要彻底混合。

试剂准备

使用前将所有试剂置于室温（16°C至25°C）。

稀释液浓缩液 - 提供的稀释液是5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水按1:5稀释（1份缓冲液浓缩液，4份dH2O）。

洗涤液浓缩液 - 提供的洗涤液是20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水按1:20稀释（1份缓冲液浓缩液，19份dH2O）。当储存温度较低时，浓缩液中可能会形成结晶。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解结晶。

酶-抗体结合物 - 通过向每个微孔板测试条添加10 ?L酶-抗体结合物至990 ?L的1X稀释液中，计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。使用前立即稀释，并避光。均匀混合，但要轻柔。避免起泡。

预涂层ELISA微孔板 - 按提供的状态即开即用。揭开箔袋，从袋中取出板。移除在测定中不会使用的条和孔，放回袋中并重新密封，连同干燥剂。

小鼠IgG2c校准物 - 根据批次特定的分析证书准备。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。