大鼠IgE ELISA是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法(ELISA),用于测量大鼠血清或血浆中的IgE。
作为ALPCO在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品IgE(大鼠)ELISA, 96孔。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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IgE(大鼠)ELISA, 96孔 | ALP-41-IGERT-E01 | 查看 |
IgE(大鼠)ELISA, 96孔检测原理:
双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理如图1所示。在这个检测中,样本中存在的IgE与已经吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgE抗体发生反应。洗涤去除未结合的蛋白质后,加入与辣根过氧化物酶(HRP)结合的抗IgE抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的IgE形成复合物。经过另一次洗涤步骤,通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)来检测与免疫吸附剂结合的酶。结合酶的量与被测试样本中IgE的浓度成正比;因此,450纳米处的吸光度是测试样本中IgE浓度的量度。测试样本中的IgE量可以通过从标准品构建的标准曲线进行插值,并根据样本稀释进行校正。
试剂(足够进行96次测定的数量)
稀释液浓缩液(测定缓冲液) 一瓶含有50 mL的5倍浓缩稀释测定缓冲液。
洗涤液浓缩液 一瓶含有50 mL的20倍浓缩洗涤液。
酶-抗体结合物 100倍 一瓶含有150 ?L的亲和纯化的抗大鼠IgE抗体与辣根过氧化物酶结合的稳定缓冲液。
显色底物溶液 一瓶含有12 mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)和过氧化氢在柠檬酸缓冲液中,pH值为3.3。
终止液 一瓶含有12 mL的0.3 M硫酸。警告:避免与皮肤接触。
抗大鼠IgE ELISA微孔板 十二个可移除的八孔(8)微孔条在孔架框中。每个孔都涂有亲和纯化的抗大鼠IgE。
大鼠IgE校准物 一瓶含有冻干的大鼠IgE校准物。
试剂准备
稀释液浓缩液 提供的稀释液是5倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水按1:5稀释(1份缓冲液浓缩液,4份dH2O)。
洗涤液浓缩液 提供的洗涤液是20倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水按1:20稀释(1份缓冲液浓缩液,19份dH2O)。当储存温度较低时,浓缩液中出现结晶并不罕见。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解结晶。
酶-抗体结合物 通过向每个微孔板测试条添加10 ?L酶-抗体结合物至990 ?L的1X稀释液中,计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。均匀混合,但要轻柔。避免起泡。
显色底物溶液 按提供的状态即开即用。
终止液 按提供的状态即开即用。
抗大鼠IgE ELISA微孔板 按提供的状态即开即用。揭开微孔板袋,从袋中取出板。移除在测定中不会使用的条和孔,放回袋中并重新密封,连同干燥剂。
大鼠IgE校准物 请参考分析证书以准备大鼠IgE校准物。
结果
从每个样本的测试值中减去平均背景值。
使用标准品观察到的结果构建标准曲线。适当的曲线拟合是四参数逻辑曲线。也可以使用二阶多项式(二次)或其他曲线拟合。
从标准曲线中插值测试样本值。校正血清稀释因子,以得出原始样本中的IgE浓度。
程序的限制
当按照包装说明书中的信息完全理解并遵循良好的实验室操作实践进行测定程序时,将获得可靠和可重复的结果。
可能影响测定性能的因素包括仪器功能的正常运行、玻璃器皿的清洁度、蒸馏水或去离子水的质量、试剂和样本移液的准确性、洗涤技术、孵育时间或温度。
不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合或替换。
ALPCO产品种类多样,可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等,涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域,尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。
作为ALPCO在中国区域的代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。
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