这种猫总IgE检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法(ELISA),用于检测猫血清或血浆中IgE的测定。仅供研究使用。不用于诊断程序。
作为ALPCO在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品IgE(猫)ELISA, 96孔。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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IgE(猫)ELISA, 96孔 | ALP-41-IGEFE-E01 | 查看 |
IgE(猫)ELISA, 96孔检测原理:
双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)的原理在图1中表示。在这个实验中,样本中的IgE与已经吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgE抗体发生反应。洗涤去除未结合的蛋白质后,加入与辣根过氧化物酶(HRP)结合的抗IgE抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的IgE形成复合物。经过另一次洗涤步骤后,通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)来检测结合的酶。结合酶的量与测试样本中IgE的浓度成正比;因此,450纳米处的吸光度是测试样本中IgE浓度的量度。测试样本中的IgE量可以通过从标准品构建的标准曲线进行插值,并根据样本稀释进行校正。
未提供但必需的材料
精密移液管(2 ?l至100 ?l)用于制作和分发稀释液
试管
微孔板洗涤/抽吸器或喷雾瓶
蒸馏水或去离子水
微孔板读数器
用于准备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿
计时器
样本收集用的离心机
血浆样本收集用的抗凝剂
样本收集和处理
所有血液成分和生物材料应视为潜在危险物品。在处理和处置时遵循通用预防措施。如果血液样本出现凝血、严重溶血、脂血,或样本的完整性受到关注,应做记录并谨慎解释结果。下面列出的样本收集和储存条件是作为一般指导方针。样本的稳定性尚未评估。
血清样本 - 应通过静脉穿刺收集血液。血液凝固后通过离心分离血清。移除血清并立即进行检测或分装后储存于-80°C(最好)或-20°C。避免反复冻融循环。
血浆样本 - 应将血液收集到含有抗凝剂的容器中,然后进行离心。立即进行检测或分装后储存于-80°C(最好)或-20°C。避免反复冻融循环。
已知干扰物质 - 叠氮化物和硫柳汞在高于0.1%的浓度下会抑制酶反应。
样本稀释
检测要求在使用前对每个测试样本进行稀释。每次进行检测时,所有样本都应以双份进行检测。推荐的稀释比例仅供参考。稀释比例应基于未知样本的预期浓度,以便稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本水平,在运行整个板之前,强烈建议对一个或两个代表性样本进行连续稀释。使用前立即稀释样本,并在2小时内使用。
血清和血浆样本 - 推荐的起始稀释比例为1:1,000。要准备1:1,000的样本稀释液,将5 ?L的样本转移到495 ?L的1X稀释液中。这会产生1:100的稀释液。接下来,将1:100的稀释液通过转移50 ?L到450 ?L的1X稀释液中进行稀释。这会产生1:1,000的稀释液。在每个阶段彻底混合。
试剂准备
使用前将所有试剂置于室温(16°C至25°C)。
稀释液浓缩液 - 提供的稀释液是5倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水按1:5稀释(1份缓冲液浓缩液,4份dH2O)。
洗涤液浓缩液 - 提供的洗涤液是20倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水按1:20稀释(1份缓冲液浓缩液,19份dH2O)。当储存温度较低时,浓缩液中可能出现结晶。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解结晶。
酶-抗体结合物 - 通过向每个微孔板测试条添加10?L酶-抗体结合物至990?L的1X稀释液中,计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。使用前立即稀释,并避光。均匀混合,但要轻柔。避免起泡。
预涂层ELISA微孔板 - 即开即用。揭开箔袋,从袋中取出板。移除并放回所有未使用的条和孔至袋中,并重新密封,连同干燥剂。
猫IgE校准物 - 根据批次特定的分析证书准备。
ALPCO产品种类多样,可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等,涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域,尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。
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