ALPCO IgE（犬）ELISA，精确检测犬体内IgE水平

该犬总IgE检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于检测犬血清或血浆中IgE的测定。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品IgE（犬）ELISA。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

IgE（犬）ELISA检测原理：

双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）的原理在图1中表示。在这个实验中，样本中的IgE与已经吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgE抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗IgE抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的IgE形成复合物。再经过一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来检测结合的酶。结合酶的量与测试样本中IgE的浓度成正比；因此，450纳米处的吸光度是测试样本中IgE浓度的量度。测试样本中的IgE量可以通过从标准品构建的标准曲线进行插值，并根据样本稀释进行校正。

未提供但必需的材料

精密移液管（2 ?l至100 ?l）用于制作和分发稀释液

试管

微孔板洗涤/抽吸器或喷雾瓶

蒸馏水或去离子水

微孔板读数器

用于准备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿

计时器

样本收集用的离心机

血浆样本收集用的抗凝剂

样本收集和处理

所有血液成分和生物材料应视为潜在危险物品。在处理和处置时遵循通用预防措施。如果血液样本出现凝血、严重溶血、脂血，或样本的完整性受到关注，应做记录并谨慎解释结果。下面列出的样本收集和储存条件是作为一般指导方针。样本的稳定性尚未评估。

血清样本 - 应通过静脉穿刺收集血液。血液凝固后通过离心分离血清。移除血清并立即进行检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

血浆样本 - 应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即进行检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

已知干扰物质 - 叠氮化物和硫柳汞在高于0.1%的浓度下会抑制酶反应。

样本稀释

该检测要求在使用前对每个测试样本进行稀释。每次进行检测时，所有样本都应以双份进行检测。推荐的稀释比例仅供参考。稀释比例应基于未知样本的预期浓度，以便稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本水平，在运行整个板之前，强烈建议对一个或两个代表性样本进行连续稀释。

血清和血浆样本 - 推荐的起始稀释比例为1:2,000。要准备1:2,000的样本稀释液，将5 ?L的样本转移到495 ?L的1X稀释液中。这会产生1:100的稀释液。接下来，将1:100的稀释液通过转移20 ?L到380 ?L的1X稀释液中进行稀释。这会产生1:2,000的稀释液。在每个阶段彻底混合。

试剂准备

使用前将所有试剂置于室温（16°C至25°C）。

稀释液浓缩液 - 提供的稀释液是5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水按1:5稀释（1份缓冲液浓缩液，4份dH2O）。

洗涤液浓缩液 - 提供的洗涤液是20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水按1:20稀释（1份缓冲液浓缩液，19份dH2O）。当储存温度较低时，浓缩液中可能出现结晶。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解结晶。

酶-抗体结合物 - 通过向每个微孔板测试条添加10?L酶-抗体结合物至990?L的1X稀释液中，计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。使用前立即稀释，并避光。均匀混合，但要轻柔。避免起泡。

预涂层ELISA微孔板 - 即开即用。揭开箔袋，从袋中取出板。移除并放回所有未使用的条和孔至袋中，并重新密封，连同干燥剂。

狗IgE校准物 - 根据批次特定的分析证书准备。

结果计算

从所有测试值中减去平均背景值（标准零的平均吸光度）。

对每个标准的平均读数进行平均，并使用结果构建标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑曲线拟合的计算机软件来减少数据构建标准曲线。也可以使用二阶多项式（二次）或其他曲线拟合，但拟合数据的精确度会较低。

从标准曲线中插值测试样本值。校正稀释因子，以得出原始样本中的IgE浓度。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。