ALPCO IgD ELISA, 96孔：多功能、高通量设计，满足大规模IgD抗体检测需求

全人类IgD检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA）用于测量人血清和血浆样本中的IgD。仅供研究使用。不是用于诊断程序

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品IgD ELISA, 96孔。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

IgD ELISA, 96孔检测原理：

双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）的原理如图1所示。在这个实验中，样本中的IgD与已经吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgD抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗IgD抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的IgD形成复合物。再经过一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来检测免疫吸附剂上结合的酶。结合酶的量与测试样本中IgD的浓度成正比；因此，450纳米处的吸光度是测试样本中IgD浓度的量度。可以通过标准曲线插值计算测试样本中的IgD量，并根据样本稀释进行校正。

未提供但必需的材料

精密移液管（2 ?L至1000 ?L）用于制作和分发稀释液

试管

喷雾瓶或微孔板洗涤/抽吸器

蒸馏水或去离子水

微孔板读数器

用于准备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿

计时器

抗凝剂（用于血浆样本）

离心机

样本收集和处理

所有血液成分和生物材料应被视为潜在危险。

在处理和处置时遵循通用预防措施。

如果血液样本出现凝血、严重溶血、脂血或样本完整性受到关注，应做记录并谨慎解释结果。

下面列出的样本收集和储存条件是作为一般指导方针。

尚未评估样本的稳定性。

血清样本：应通过静脉穿刺收集血液。通过离心分离血清和细胞。移除血清并立即进行检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

血浆样本：应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即进行检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

已知干扰物质：高于0.1%浓度的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。

试剂准备

使用前将所有试剂置于室温（16°C至25°C）。

稀释液浓缩液 - 提供的稀释液是5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水按1:5稀释（1份缓冲液浓缩液，4份dH2O）。

洗涤液浓缩液 - 提供的洗涤液是20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水按1:20稀释（1份缓冲液浓缩液，19份dH2O）。当储存温度较低时，浓缩液中可能出现结晶。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解结晶。

酶-抗体结合物 - 通过向每个微孔板测试条添加10 ?L酶-抗体结合物至990 ?L的1X稀释液中，计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。使用前立即稀释，并避光。均匀混合，但要轻柔。避免起泡。

预涂层ELISA微孔板 - 按提供的状态使用。揭开箔袋，从袋中取出板。移除在检测中不会使用的条和孔，放回袋中并重新密封，连同干燥剂。

人IgD校准物 - 根据批次特定的分析证书准备。

检测程序

所有样本和标准品应以双份进行检测。

标准品和样本应尽快装入ELISA孔中，以避免OD读数变化。使用多通道移液管可以减少这种情况的发生。分别移液100 μL： 0标准（0.0 ng/mL）双份 1标准（6.25 ng/mL）双份 2标准（12.50 ng/mL）双份 3标准（25 ng/mL）双份 4标准（50 ng/mL）双份 5标准（100 ng/mL）双份 6标准（200 ng/mL）双份 7标准（400 ng/mL）双份

分别移液100 μL样本（双份）至预指定孔中。

在室温下孵育微孔板六十（60 ± 2）分钟。孵育期间保持板盖覆盖并保持水平。

孵育后，抽吸孔内内容物。

用适当稀释的洗涤液完全填满每个孔并抽吸。重复三次，总共四次洗涤。如果手动洗涤：用洗涤缓冲液完全填满孔，倒置板然后倾倒/摇晃内容物至废液容器。随后用吸水纸尖锐击打孔以去除残留缓冲液。重复三次，总共四次洗涤。

向每个孔中分别移液100 μL适当稀释的酶-抗体结合物。在室温下孵育十（10 ± 2）分钟。孵育期间保持板盖覆盖，避光并保持水平。

如步骤5和6所述洗涤和吸干孔。

向每个孔中分别移液100 μL TMB底物溶液。

在暗处室温下精确孵育十（10）分钟。

十分钟后，向每个孔中加入100 μL终止液。

在三十分钟内测定每个孔内内容物的吸光度（450 nm）。根据制造商的规格校准板读数器。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。