IgA检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法(ELISA),用于定量兔血浆和血清样本中免疫球蛋白A(IgA)的测定。用于研究用途只有。不用于诊断程序。
作为ALPCO在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品兔IgA ELISA试剂盒。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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兔IgA ELISA试剂盒 | ALP-41-IGARB-E01 | 查看 |
兔IgA ELISA试剂盒检测原理:
双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)的原理如图1所示。在这种测定中,样本中的IgA与吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗IgA抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后,加入与辣根过氧化物酶(HRP)偶联的抗IgA抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的IgA形成复合物。经过另一次洗涤步骤后,通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)来测定免疫吸附剂上结合的酶。结合酶的量与测试样本中IgA的浓度直接相关;因此,450纳米处的吸光度是测试样本中IgA浓度的量度。测试样本中IgA的量可以从标准曲线中插值得到,并根据样本稀释进行校正。
所需材料(未提供)
精密移液器(2微升至1000微升),用于制备和分发稀释液
试管
喷雾瓶或微孔板洗涤器/抽吸器
蒸馏水或去离子水
微孔板读取器
用于制备试剂和缓冲液的各种玻璃器皿
计时器
抗凝剂(用于血浆样本收集)
离心机
样本收集和处理
所有血液成分和生物材料应视为潜在危险物。处理和处置时应遵循通用预防措施。
如果血液样本出现凝块、严重溶血、脂血或样本完整性存疑,请做好记录并谨慎解释结果。
以下列出的样本收集和储存条件仅供参考。样本稳定性未经评估。
血清样本:应通过静脉穿刺收集血液。血液凝固后通过离心分离血清。取出血清后立即进行测定或分装后储存于-80°C(最好)或-20°C。避免反复冻融循环。
血浆样本:应将血液收集到含有抗凝剂的容器中,然后进行离心。立即进行测定或分装后储存于-80°C(最好)或-20°C。避免反复冻融循环。
已知干扰物质:叠氮化物和硫柳汞在高于0.1%的浓度时会抑制酶反应。
样本稀释
测定要求每个测试样本在使用前进行稀释。每次进行测定时,所有样本应进行双重测定。推荐的稀释比例仅供参考。
稀释应基于未知样本的预期浓度,以使稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本值,在运行整个板之前,强烈建议对一个或两个代表性样本进行系列稀释测定。
血清和血浆样本 - 建议起始稀释比例为1:2,000。要制备1:2,000的样本稀释液,将5微升样本转移到495微升1X稀释液中。这得到1:100的稀释。接下来,将1:100的样本通过将20微升转移到380微升1X稀释液中进行稀释。这得到1:2,000的稀释。每个阶段都要彻底混合。
结果计算
从所有孔的测试值中减去平均背景值(标准零的平均吸光度读数)。
平均每个标准品的双重读数,并使用结果构建标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑曲线拟合的计算机软件来减少数据,构建标准曲线。也可以使用二阶多项式(二次)或其他曲线拟合;然而,它们对数据的拟合精度会较低。
从标准曲线中插值测试样本值。校正血清稀释因子,得出原始样本中的IgA浓度。
ALPCO产品种类多样,可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等,涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域,尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。
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