ALPCO IgG2A(小鼠)ELISA, 96孔检测原理&结果计算

IgG2a检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于检测小鼠血清和血浆样本中IgG2a的测定。仅供研究使用。不是为了在诊断程序中的使用。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品IgG2A(小鼠)ELISA, 96孔。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

IgG2A(小鼠)ELISA, 96孔检测原理：

双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）的原理在图1中表示。在这种测定中，样品中存在的IgG2a与已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗IgG2a抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗IgG2a抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的IgG2a形成复合物。经过另一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB），测定免疫吸附剂上结合的酶。结合的酶量与测试样品中IgG2a的浓度直接相关；因此，450纳米处的吸光度是测试样品中IgG2a浓度的量度。测试样品中IgG2a的量可以从标准曲线中插值得出，并根据样品稀释进行校正。

未提供的所需材料

? 精密移液器（2微升至1000微升），用于制备和分发稀释液

? 试管

? 喷雾瓶或微孔板洗涤器/抽吸器

? 蒸馏水或去离子水

? 微孔板读取器

? 用于制备试剂和缓冲溶液的各种玻璃器皿

? 样本收集用的离心机

? 血浆收集用的抗凝剂

? 计时器

样本收集和处理

所有血液成分和生物材料应视为潜在危险。处理和处置时遵循通用预防措施。如果血液样本出现凝固、严重溶血、脂血，或样本完整性受到质疑，请做记录并谨慎解释结果。

以下列出的样本收集和储存条件仅供参考。尚未评估样本稳定性。

? 血清样本 - 应通过静脉穿刺收集血液。血凝块形成后通过离心分离血清。取出血清并立即进行测定或分装样本并储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

? 血浆样本 - 应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即进行测定或分装样本并储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融循环。

? 已知干扰物质 - 浓度高于0.1%的氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。

样本稀释

测定要求在测试前对每个测试样本进行稀释。每次进行测定时，所有样本都应以双份进行测定。推荐的稀释只是建议。稀释应基于未知样本的预期浓度，使稀释后的样本落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样本水平，在运行整个板之前，强烈建议对一个或两个代表性样本进行系列稀释。

? 血清和血浆样本 - 推荐的起始稀释为1:50,000。要准备1:50,000的样本稀释，将5微升的样本转移到995微升的1倍稀释液中。这给出1:200的稀释。接下来，将1:200的样本通过转移4微升到996微升的1倍稀释液中进行稀释。这产生1:50,000的样本稀释。在每个阶段彻底混合。

结果计算

从每个孔的测试值中减去平均背景值（标准零的平均吸光度读数）。

平均每个标准品的双份读数，并使用结果构建标准曲线。通过使用能够生成4参数逻辑曲线拟合的计算机软件来减少数据来构建标准曲线。也可以使用二阶多项式（二次）或其他曲线拟合；然而，它们对数据的拟合将不够精确。

从标准曲线中插值得到测试样本值。校正血清稀释因子，得出原始样本中IgG2a的浓度。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。