ALPCO 大鼠触珠蛋白ELISA：优化实验流程与提高检测准确性

急性期蛋白是血浆蛋白，它们在感染、炎症或创伤后浓度增加。第一个被识别的急性期蛋白是在1930年由Tillet和Frances在人类中发现的。血浆蛋白（Hp）是一种异质性血浆蛋白，主要在肝脏中合成。血浆蛋白单体由两个重链（β链，40kD）和两个轻链（α链，α1为9kD和α2为16kD）组成，它们通过二硫键连接。三种主要的血浆蛋白类型是Hp1-1（单体，98kD）、Hp1-2（聚合物，约200kD）和Hp2-2（约400kD）。血浆蛋白水平在急性组织损伤后迅速上升（在24至48小时内），一旦刺激因素被移除，水平就会迅速下降。研究表明，溶血性贫血患者的血浆蛋白水平会降低。血浆蛋白对血红蛋白（Hb）有很强的亲和力，其功能似乎是防止血红蛋白在尿液中的丢失，这将导致铁的丢失。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品大鼠触珠蛋白ELISA。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

大鼠触珠蛋白ELISA检测原理：

双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）的原理在图1中表示。在这种测定中，样品中的血浆蛋白与已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗血浆蛋白抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗血浆蛋白抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的血浆蛋白形成复合物。经过另一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB），测定免疫吸附剂上结合的酶。结合的酶量与测试样品中血浆蛋白的浓度直接相关；因此，450纳米处的吸光度是测试样品中血浆蛋白浓度的量度。测试样品中血浆蛋白的量可以从标准曲线中插值得出，并根据样品稀释进行校正。

试剂（足够96次测定的数量）

稀释液浓缩液（测定缓冲液） 一瓶含有50毫升5倍浓缩的稀释测定缓冲液。

洗涤液浓缩液 一瓶含有50毫升20倍浓缩的洗涤液。

酶-抗体结合物100倍 一瓶含有150微升与辣根过氧化物酶结合的亲和纯化抗大鼠血浆蛋白抗体，在稳定缓冲液中。

显色底物溶液 一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）和过氧化氢，在柠檬酸缓冲液中，pH值为3.3。

终止液 一瓶含有12毫升0.3摩尔硫酸。警告：避免与皮肤接触。

抗大鼠血浆蛋白ELISA微孔板 十二个可移动的八（8）孔微孔条在孔架框架中。每个孔都涂有亲和纯化的抗大鼠血浆蛋白。

大鼠血浆蛋白校准液 一瓶含有冻干的大鼠血浆蛋白校准液。 仅限研究使用

试剂准备

稀释液浓缩液

提供的稀释液是5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，4份dH2O）稀释1:5。

洗涤液浓缩液

提供的洗涤液是20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，19份dH2O）稀释1:20。在储存温度较低时，浓缩液中结晶形成并不少见。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。

酶-抗体结合物

通过向每个微孔板测试条中添加10微升酶-抗体结合物到990微升1倍稀释液中，计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。均匀但轻柔地混合。避免起泡。

显色底物溶液

按提供状态使用。

终止液

按提供状态使用。

抗大鼠血浆蛋白ELISA微孔板

按提供状态使用。打开微孔板袋，从袋中取出板。取出在测定中不会使用的所有的条和孔，放回袋中并重新密封，连同干燥剂。

大鼠血浆蛋白校准液

请参考分析证书准备大鼠血浆蛋白校准液。

样本收集和处理

应通过静脉穿刺收集血液。血凝块形成后，应通过离心分离血清。对于血浆样本，应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。应小心操作以尽量减少溶血，因为过度溶血可能会影响结果。立即进行测定或分装样本并储存于-20°C。避免反复冻融循环。

1. 预防措施

对于可能含有病原体的任何样本，必须小心操作以防止与开放性伤口接触。

2. 添加剂和防腐剂

不需要任何添加剂或防腐剂来保持样本的完整性。避免使用氮化物污染。

3. 已知干扰物质

氮化物和硫柳汞在浓度高于0.1%时会抑制酶反应。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。