ALPCO 生物医学研究中的应用：猴胱抑素C ELISA, 96孔试剂盒

Cystatin C（CYS）是一种存在于体液中的小分子半胱氨酸蛋白酶抑制剂。研究表明，Cystatin C水平与肾小球滤过率直接相关。Cystatin C（CYS）检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫吸附测定（ELISA），用于测量猴体液中的Cystatin C。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品猴胱抑素C ELISA, 96孔。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

猴胱抑素C ELISA, 96孔检测原理：

如图1所示，在这种测定中，样品中的CYS与已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗CYS抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的抗CYS抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的CYS形成复合物。经过一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来测定与免疫吸附剂结合的酶。结合的酶量与样品中测试的CYS浓度直接相关；因此，450纳米处的吸光度是测试样品中CYS浓度的量度。测试样品中的CYS量可以从标准曲线中插值得出，并根据样品稀释进行校正。

试剂（足够进行96次测定的数量）

1. 稀释液浓缩液（测定缓冲液）

一瓶含有60毫升1X稀释液测定缓冲液。

2. 洗涤液浓缩液

一瓶含有50毫升20倍浓缩的洗涤液。

3. 检测抗体100倍

一瓶含有150微升与辣根过氧化物酶结合的亲和纯化抗Cystatin C抗体，置于稳定化缓冲液中。

4. HRP-链霉亲和素100倍

一瓶含有150微升辣根过氧化物酶结合的链霉亲和素，置于稳定化缓冲液中。

5. 显色底物溶液

一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）和过氧化氢在柠檬酸缓冲液中，pH值为3.3。

6. 终止液

一瓶含有12毫升0.3M硫酸。警告：避免与皮肤接触。

7. 抗Cystatin C ELISA微孔板

十二个可移动的八（8）孔微孔条在孔架中。每个孔都涂有亲和纯化抗CYS抗体。

8. Cystatin C校准液

一瓶含有冻干的Cystatin C校准液。本试剂盒中使用的校准液为人源。

仅限研究使用

试剂准备

1. 稀释液浓缩液

按提供使用即可。

2. 洗涤液浓缩液

提供的洗涤液为20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩液，19份dH2O）稀释1:20。当储存温度较低时，浓缩液中结晶形成并不罕见。稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。

3. 检测抗体100倍

通过向每个微孔板测试条添加10微升检测抗体至990微升1X稀释液中，计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。均匀但轻柔地混合。避免起泡。

4. HRP-链霉亲和素100倍

通过向每个微孔板测试条添加10微升HRP-链霉亲和素至990微升1X稀释液中，计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。均匀但轻柔地混合。避免起泡。

5. 显色底物溶液

按提供使用即可。

6. 终止液

按提供使用即可。

最终反应混合物的稳定性

添加终止液后，最终反应混合物的吸光度可在2小时内测量。然而，良好的实验室操作规范要求尽快进行测量。

结果

1. 从每个样品的测试值中减去平均背景值。

2. 使用标准观察到的结果构建标准曲线。适当的曲线拟合是四参数逻辑曲线。也可以使用二阶多项式（二次）或其他曲线拟合。

3. 从标准曲线中插值得到测试样品值。校正血清稀释因子，以得到原始样品中的Cystatin C浓度。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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