C-反应蛋白(马)ELISA是一种高度敏感的双位点酶联马血清中C-反应蛋白的ELISA定量测定以及血浆。仅供研究使用。不用于诊断程序。
作为ALPCO在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品c反应蛋白(马)ELISA, 96孔。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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c反应蛋白(马)ELISA, 96孔 | ALP-41-CRPEQ-E01 | 查看 |
c反应蛋白(马)ELISA, 96孔检测原理:
双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)的原理如图1所示。在这种测定中,样品中的C反应蛋白(CRP)与已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗CRP蛋白抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后,加入辣根过氧化物酶(HRP)偶联的抗CRP蛋白抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的CRP形成复合物。经过再次洗涤后,通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)来测定与免疫吸附剂结合的酶。结合的酶量与测试样品中CRP的浓度成正比;因此,450纳米处的吸光度是测试样品中CRP蛋白浓度的量度。测试样品中CRP的量可以从标准曲线中插值得出,并根据样品稀释进行校正。
需要的材料但未提供
? 精密移液器(2 ?L至1000 ?L),用于制备和分发稀释液
? 试管
? 喷雾瓶或微孔板洗涤/抽吸器
? 蒸馏水或去离子水
? 微孔板读取器
? 制备试剂和缓冲溶液所需的各种玻璃器皿
? 计时器
? 离心机
? 抗凝剂(用于血浆样品收集)
样品收集和处理
所有血液成分和生物材料应视为潜在危险。
处理和处置时遵循通用预防措施。
如果血液样品出现凝块、严重溶血、脂血或样品完整性受到质疑,请记录并谨慎解释结果。
以下列出的样品收集和储存条件仅供参考。
样品稳定性尚未评估。
? 血清样品:应通过静脉穿刺收集血液。血凝后通过离心分离血清。取出血清立即进行测定或分装后储存于-80°C(最好)或-20°C。避免反复冻融。
? 血浆样品:应将血液收集到含有抗凝剂的容器中,然后进行离心。立即进行测定或分装后储存于-80°C(最好)或-20°C。避免反复冻融。
? 已知干扰物质:浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。
样品稀释
测定要求每个测试样品在使用前进行稀释。每次进行测定时,所有样品都应以双份进行测定。推荐的稀释比例仅供参考。
稀释比例应基于未知样品的预期浓度,以便稀释后的样品落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样品值,强烈建议在运行整个板之前,先用一个或两个代表性样品进行系列稀释。
? 血清和血浆样品:推荐的起始稀释比例是1:100。要制备1:100的样品稀释液,将5 ?L的样品转移到495 ?L的1X稀释液中。这会产生1:100的稀释比例。彻底混合。
结果计算
1. 从所有孔的测试值中减去平均背景值(标准零的平均吸光度读数)。
2. 对每个标准的平均重复读数进行平均,并使用结果构建标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑(4-PL)曲线拟合的计算机软件来减少数据来构建标准曲线。也可以使用二次多项式(二次)或其他曲线拟合;然而,它们对数据的拟合精度会较低。
3. 从标准曲线中插值得到测试样品值。校正稀释因子,以得出原始样品中的CRP蛋白浓度。
ALPCO产品种类多样,可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等,涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域,尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。
作为ALPCO在中国区域的代理,艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。
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