ALPCO 补体因子3(大鼠)ELISA试剂盒，96w检测原理

这种补体因子3（C3）检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法ELISA法测定大鼠血浆和血清样本中的C3

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补体因子3(大鼠)ELISA试剂盒，96w检测原理：

双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）的原理如图1所示。在这种测定中，样品中的C3与已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗C3抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入辣根过氧化物酶（HRP）偶联的抗C3抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的C3形成复合物。经过再次洗涤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来测定与免疫吸附剂结合的酶。结合的酶量与测试样品中C3的浓度成正比；因此，450纳米处的吸光度是测试样品中C3浓度的量度。测试样品中C3的量可以从标准曲线中插值得出，并根据样品稀释进行校正。

样品收集和处理

所有血液成分和生物材料应视为潜在危险。

处理和处置时遵循通用预防措施。

如果血液样品出现凝块、严重溶血、脂血或样品完整性受到质疑，请记录并谨慎解释结果。

以下列出的样品收集和储存条件仅供参考。

样品稳定性尚未评估。

? 血清样品：应通过静脉穿刺收集血液。血凝后通过离心分离血清。取出血清立即进行测定或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

? 血浆样品：应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即进行测定或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

? 已知干扰物质：浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。

样品稀释

测定要求每个测试样品在使用前进行稀释。每次进行测定时，所有样品都应以双份进行测定。推荐的稀释比例仅供参考。

稀释比例应基于未知样品的预期浓度，以便稀释后的样品落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样品水平，在运行整个板之前，强烈建议对一个或两个代表性样品进行系列稀释。

血清和血浆样品 - 推荐的起始稀释比例是1:10,000。要制备1:10,000的样品稀释液，将5 ?l的样品转移到495 ?l的1X稀释液中。这会产生1:100的稀释比例。

接下来，将1:100的样品通过将5?l转移到495 ?l的1X稀释液中进行稀释。这会产生1:10,000的样品稀释比例。每个阶段都要彻底混合。

试剂准备

? 使用前将所有试剂置于室温（16°C至25°C）。

? 稀释液浓缩物 - 提供的稀释液为5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩物，4份dH2O）按1:5稀释。

? 洗涤液浓缩物 - 提供的洗涤液为20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩物，19份dH2O）按1:20稀释。

浓缩物在低温储存时可能会形成晶体。

稀释前将浓缩物加热至30-35°C可以溶解晶体。

? 酶-抗体结合物 - 通过向每个微孔板测试条使用的1X稀释液中添加10 ?L酶-抗体结合物和990 ?L来计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。

使用前立即稀释，并避免光照。均匀混合，但要轻柔。避免产生泡沫。

? 预包被ELISA微孔板 - 按提供的状态使用。

打开铝箔袋，从袋中取出板。

取出在测定中不会使用的所有条和孔，放回袋中并重新密封，同时放回干燥剂。

? 大鼠C3校准物 - 根据批次特定的分析证书进行准备。

附录A - 参考血清信息

试剂盒中包含一瓶参考血清。有关批次特定的信息，请参考随附的产品概况表。

请注意以下几点：

1. 如果保存时间超过7天，参考血清应冷冻保存，并且在有效期前保持稳定。

2. 参考血清应适当稀释，以适应标准范围曲线。有关说明，请参考协议中的“样品稀释”部分。

3. 在移液样品（程序部分）时，也应以双份移液参考血清。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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