抗凝血酶III(AT3)是一种由肝脏产生的小糖蛋白。它是凝血级联反应的主要抑制剂,几乎抑制所有凝血酶,包括凝血酶。抗凝血酶III的缺乏,无论是遗传性的还是获得性的,都可能导致血栓栓塞性疾病。
抗凝血酶III检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫吸附测定(ELISA),用于测量大鼠生物样品中的抗凝血酶III。
作为ALPCO在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品抗凝血酶III(大鼠)ELISA试剂盒,96w。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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抗凝血酶III(大鼠)ELISA试剂盒,96w | ALP-41-AT3RT-E01 | 查看 |
抗凝血酶III(大鼠)ELISA试剂盒,96w检测原理:
如图1所示,在这种测定中,样品中存在的抗凝血酶III与已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗抗凝血酶III抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后,加入与辣根过氧化物酶(HRP)偶联的抗AT3抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的AT3形成复合物。经过另一次洗涤步骤后,通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB),检测免疫吸附剂上的酶。结合的酶量与测试样品中AT3的浓度直接相关;因此,450纳米处的吸光度是测试样品中AT3浓度的量度。测试样品中的AT3量可以从标准曲线中插值得到,并根据样品稀释进行校正。
试剂(足够96次测定的数量)
1. 稀释液浓缩物(测定缓冲液)
一瓶含有50毫升5倍浓缩稀释测定缓冲液。
2. 洗涤液浓缩物
一瓶含有50毫升20倍浓缩洗涤液。
3. 酶-抗体结合物100倍
一瓶含有150微升与辣根过氧化物酶结合的亲和纯化抗大鼠抗凝血酶III抗体,置于稳定化缓冲液中。
4. 显色底物溶液
一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)和过氧化氢的柠檬酸缓冲液,pH值为3.3。
5. 终止溶液
一瓶含有12毫升0.3 M硫酸。警告:避免与皮肤接触。
6. 抗大鼠抗凝血酶III ELISA微孔板
十二个可移动的八(8)孔微孔条置于孔架中。每个孔都涂有亲和纯化的抗大鼠AT3。
7. 大鼠抗凝血酶III校准品
一瓶含有冻干的大鼠抗凝血酶III校准品。
试剂准备
1. 稀释液浓缩物
提供的稀释液是5倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水(1份缓冲液浓缩物,4份dH2O)稀释1:5。
2. 洗涤液浓缩物
提供的洗涤液是20倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水(1份缓冲液浓缩物,19份dH2O)稀释1:20。浓缩物在低温储存时可能会形成晶体。稀释前将浓缩物加热至30-35°C可以溶解晶体。
3. 酶-抗体结合物
通过向每个微孔板测试条添加10微升酶-抗体结合物至990微升的1X稀释液中,计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。均匀混合,但要轻柔。避免产生泡沫。
4. 显色底物溶液
按提供的状态使用。
5. 终止溶液
按提供的状态使用。
6. 抗大鼠抗凝血酶III ELISA微孔板
按提供的状态使用。揭开微孔板袋,从袋中取出板。取出测试中不会使用的条和孔,放回袋中并重新密封,同时放回干燥剂。
7. 大鼠抗凝血酶III校准品
向大鼠抗凝血酶III校准品中加入1.0毫升蒸馏水或去离子水,并轻轻混合直至溶解。校准品现在浓度为3.164微克/毫升(如果打算将来使用,重组校准品应分装并冷冻)。大鼠抗凝血酶III标准品需要在使用前立即准备(见下表)。每个步骤之间要充分混合。避免产生泡沫。
ALPCO产品种类多样,可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等,涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域,尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。
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