ALPCO 载脂蛋白H (APOH) ELISA试剂盒样品稀释&试剂准备方案

Apo-H检测试剂盒是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于测量人类样本中的载脂蛋白-H。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品载脂蛋白H (APOH) ELISA试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

载脂蛋白H (APOH) ELISA试剂盒检测原理：

如图1所示，在这种测定中，样品中存在的载脂蛋白H（Apo-H）与已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗Apo-H抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的抗Apo-H抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的Apo-H形成复合物。经过另一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB），检测免疫吸附剂上的酶。结合的酶量与测试样品中Apo-H的浓度直接相关。因此，450纳米处的吸光度是测试样品中Apo-H浓度的量度。测试样品中的Apo-H量可以从标准曲线中插值得到，并根据样品稀释进行校正。

样品收集和处理

所有血液成分和生物材料应视为潜在危险物。处理和处置时应遵循通用预防措施。

如果血液样品出现凝固、严重溶血、脂血或样品完整性受到怀疑，请做好记录，并谨慎解释结果。

以下列出的样品收集和储存条件仅供参考。样品的稳定性尚未评估。

- 血清样品：应通过静脉穿刺收集血液。通过离心分离血清和细胞。取出血清并立即检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

- 血浆样品：应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

- 尿液样品：使用无菌或清洁的尿液收集器收集中段尿液。离心以去除细胞碎片。立即检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

- 已知干扰物质：浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。

样品稀释

该检测要求每个测试样品在使用前进行稀释。每次进行检测时，所有样品都应以双份量进行检测。推荐的稀释比例仅供参考。稀释应基于未知样品的预期浓度，以使稀释后的样品落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样品值，强烈建议在运行整个板之前，先对一个或两个代表性样品进行系列稀释检测。

- 血清和血浆样品 - 建议起始稀释比例为1:10,000。要制备1:10,000的样品稀释液，将5微升样品转移到495微升的1X稀释液中。这会产生1:100的稀释。接下来，将1:100的样品通过将5微升转移到495微升的1X稀释液中进行稀释。这会产生1:10,000的稀释。每个阶段都要彻底混合。

试剂准备

- 使用前将所有试剂置于室温（16°C至25°C）。

- 稀释液浓缩物 - 提供的稀释液是5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩物，4份dH2O）稀释1:5。

- 洗涤液浓缩物 - 提供的洗涤液是20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩物，19份dH2O）稀释1:20。浓缩物在低温储存时可能会形成晶体。稀释前将浓缩物加热至30-35°C可以溶解晶体。

- 酶-抗体结合物 - 计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量，为每个测试条添加10微升酶-抗体结合物至990微升的1X稀释液中。使用前立即稀释并避光。均匀混合，但要轻柔。避免产生泡沫。

- 预包被ELISA微孔板 - 按提供的状态使用。揭开铝箔袋，从袋中取出板。取出测试中不会使用的条和孔，放回袋中并重新密封，同时放回干燥剂。

- 人Apo-H校准品 - 根据特定批次的分析证明书准备。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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