ALPCO 大鼠白蛋白ELISA检测程序&样品收集和处理

大鼠白蛋白ELISA是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于大鼠血清、血浆和尿液中白蛋白的测定。仅供研究使用。不是为了用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品大鼠白蛋白ELISA。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

大鼠白蛋白ELISA检测原理：

如图1所示，在这种测定中，样品中存在的白蛋白与已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗白蛋白抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的抗白蛋白抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的白蛋白形成复合物。经过另一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB），检测免疫吸附剂上的酶。结合的酶量与测试样品中白蛋白的浓度直接相关；因此，450纳米处的吸光度是测试样品中白蛋白浓度的量度。测试样品中的白蛋白量可以从标准曲线中插值得到，并根据样品稀释进行校正。

检测程序

请参阅附录A以获取参考血清信息。

1. 所有样品和标准品应以双份量进行检测。

2. 标准品和样品应尽快装入ELISA孔中，以避免OD读数发生偏移。使用多通道移液器可以减少这种情况的发生。

- 取100微升：

- 标准0（0.0纳克/毫升）双份

- 标准1（6.25纳克/毫升）双份

- 标准2（12.5纳克/毫升）双份

- 标准3（25纳克/毫升）双份

- 标准4（50纳克/毫升）双份

- 标准5（100纳克/毫升）双份

- 标准6（200纳克/毫升）双份

- 标准7（400纳克/毫升）双份

3. 取100微升样品（双份）加入预先指定的孔中。

4. 将微孔板在室温下孵育三十（30±2）分钟。孵育期间保持板盖盖好并保持水平。

5. 孵育后，抽吸孔中的内容物。

6. 用适当稀释的洗涤液完全填满每个孔并抽吸。重复三次，总共进行四次洗涤。如果手动洗涤：用洗涤缓冲液完全填满孔，然后将板倒置，将内容物倒入废液容器中。接着用力将孔敲击在吸水纸上以去除残留缓冲液。重复三次，总共进行四次洗涤。

7. 取100微升适当稀释的酶-抗体结合物到每个孔中。在室温下孵育三十（30±2）分钟。孵育期间保持板盖盖好并置于暗处且保持水平。

8. 按照步骤5和6中描述的方式洗涤并拍干孔。

9. 取100微升TMB底物溶液到每个孔中。

10. 在暗处室温下精确孵育十分钟（10）。

11. 十分钟后，向每个孔中加入100微升终止溶液。

12. 在30分钟内测定每个孔中内容物的吸光度（450纳米）。根据制造商的规格校准板读取器。

需要但未提供的物料

- 精密移液器（2微升至1000微升），用于制备和分发稀释液

- 试管

- 微孔板洗涤/抽吸器

- 蒸馏水或去离子水

- 微孔板读取器

- 制备试剂和缓冲溶液所需的各种玻璃器皿

- 计时器

- 用于样品收集的离心机

- 抗凝剂（用于血浆样品收集）

样品收集和处理

所有血液成分和生物材料应视为潜在危险物。处理和处置时应遵循通用预防措施。如果血液样品出现凝固、严重溶血、脂血或样品完整性受到怀疑，请做好记录，并谨慎解释结果。以下列出的样品收集和储存条件仅供参考。样品的稳定性尚未评估。

- 血清样品：应通过静脉穿刺收集血液。通过离心分离血清和细胞。取出血清并立即检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

- 血浆样品：应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

- 尿液样品：使用无菌或清洁的尿液收集器收集中段尿液。离心以去除细胞碎片。立即检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

- 已知干扰物质：浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。