ALPCO 小鼠白蛋白ELISA：从样本收集到数据分析的详细流程

小鼠白蛋白ELISA是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于测量小鼠血清、血浆和尿液中的白蛋白。仅供研究使用。不适用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品小鼠白蛋白ELISA。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

小鼠白蛋白ELISA检测原理：

双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）的原理如图1所示。在这种检测中，样品中的白蛋白与已吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗白蛋白抗体反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入与辣根过氧化物酶（HRP）偶联的抗白蛋白抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的白蛋白形成复合物。经过另一次洗涤步骤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB），检测免疫吸附剂上的酶。结合的酶量与测试样品中白蛋白的浓度直接相关；因此，450纳米处的吸光度是测试样品中白蛋白浓度的量度。测试样品中的白蛋白量可以从标准曲线中插值得到，并根据样品稀释进行校正。

操作程序的局限性

当完全理解随附说明书中的信息，并遵守良好的实验室操作规范时，可以获得可靠和可重复的结果。可能影响检测性能的因素包括仪器功能、玻璃器皿的清洁度、蒸馏水或去离子水的质量、试剂和样品移液的准确性、洗涤技术、孵育时间或温度。不要将不同批次或来源的试剂混合或替换。

需要但未提供的物料

- 精密移液器（2微升至1000微升），用于制备和分发稀释液

- 试管

- 喷雾瓶或微孔板洗涤/抽吸器

- 蒸馏水或去离子水

- 微孔板读取器

- 制备试剂和缓冲溶液所需的各种玻璃器皿

- 计时器

- 离心机

- 抗凝剂（用于血浆样品收集）

样品收集和处理

所有血液成分和生物材料应视为潜在危险物。处理和处置时应遵循通用预防措施。

如果血液样品出现凝固、严重溶血、脂血或样品完整性受到怀疑，请做好记录，并谨慎解释结果。

以下列出的样品收集和储存条件仅供参考。样品的稳定性尚未评估。

- 血清样品：应通过静脉穿刺收集血液。通过离心分离血清和细胞。取出血清并立即检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

- 血浆样品：应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

- 尿液样品：使用无菌或清洁的尿液收集器收集中段尿液。离心以去除细胞碎片。立即检测或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

- 已知干扰物质：浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。

结果计算

1. 从所有孔的测试值中减去平均背景值（标准零的平均吸光度读数）。

2. 对每个标准的平均重复读数取平均值，并使用结果构建标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑（4-PL）曲线拟合的计算机软件来减少数据，构建标准曲线。也可以使用二阶多项式（二次）或其他曲线拟合，但它们对数据的拟合将不够精确。

3. 从标准曲线中插值得到测试样品值。校正稀释因子，以得到原始样品中的白蛋白浓度。

附录A - 参考血清信息

本试剂盒中包含一瓶参考血清。请参阅随附的产品概况表以获取特定批次的信息。请注意以下几点：

1. 收到参考血清后应立即冷冻。如果储存得当，直到过期日期都是稳定的。

2. 参考血清应适当稀释，以适应标准曲线范围。请参阅协议中的“样品稀释”部分的说明。

3. 在移液样品（操作程序部分）时，也要以双份量移液参考血清。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。