α1-抗胰蛋白酶是一种52kDA丝氨酸蛋白酶血液中的抑制剂(丝氨酸蛋白酶抑制剂),保护组织免受炎症细胞中的酶,尤其是弹性蛋白酶。在某些急性期炎症反应,A1AT升高以限制活化中性粒细胞引起的损伤以及它们的弹性蛋白酶。A1AT障碍包括A1AT缺乏症,这是一种遗传性疾病可能导致严重的组织破坏炎症。这可能会导致肺部严重者为肺气肿和肝硬化。A1AT的遗传变异确实存在。阿尔法1-抗胰蛋白酶(A1AT)检测试剂盒是一种高度灵敏双位点酶联免疫测定(ELISA)用于测量生物体液中的A1AT狗。
作为ALPCO在中国的区域总代理,艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品α1-抗胰蛋白酶(犬)ELISA试剂盒,96孔。产品仅用于科研,不可用于临床诊断。
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α1-抗胰蛋白酶(犬)ELISA试剂盒,96孔 | ALP-41-A1ACA-E01 | 查看 |
α1-抗胰蛋白酶(犬)ELISA试剂盒,96孔检测原理:
双抗体夹心酶联免疫吸附测定的原理如图1所示。在这种测定中,样品中的α1-抗胰蛋白酶与吸附在聚苯乙烯微孔板表面的抗α1-抗胰蛋白酶抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后,加入与辣根过氧化物酶(HRP)结合的抗A1AT抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的A1AT形成复合物。经过另一次洗涤步骤后,通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)来测定免疫吸附剂上结合的酶。结合的酶量与测试样品中A1AT的浓度直接相关;因此,450纳米处的吸光度是测试样品中A1AT浓度的量度。测试样品中A1AT的量可以从标准品构建的标准曲线中插值得到,并根据样品稀释进行校正。
试剂:
1. 稀释液浓缩液(运行缓冲液)
一瓶含有50毫升5倍浓缩稀释液的运行缓冲液。
2. 洗涤液浓缩液
一瓶含有50毫升20倍浓缩的洗涤液。
3. 酶-抗体结合物100倍
一瓶含有150微升亲和纯化的抗犬α1-抗胰蛋白酶抗体,与辣根过氧化物酶结合,并在稳定缓冲液中。
4. 显色底物溶液
一瓶含有12毫升3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)和过氧化氢,在柠檬酸缓冲液中,pH值为3.3。
5. 终止液
一瓶含有12毫升0.3M硫酸。
警告:避免与皮肤接触。
6. 抗犬α1-抗胰蛋白酶ELISA微孔板
十二个可移动的八(8)孔微孔条,在孔架中。每个孔都涂有亲和纯化的抗犬A1AT。
7. 犬α1-抗胰蛋白酶校准品
一瓶含有犬α1-抗胰蛋白酶校准品。
试剂准备:
1. 稀释液浓缩液
提供的稀释液是5倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水(1份缓冲液浓缩液,4份dH2O)稀释1/5。
2. 洗涤液浓缩液
提供的洗涤液是20倍浓缩液,必须用蒸馏水或去离子水(1份缓冲液浓缩液,19份dH2O)稀释1/20。当储存温度较低时,浓缩液中出现晶体并不罕见。在稀释前将浓缩液加热至30-35°C可以溶解晶体。
3. 酶-抗体结合物
通过向每个微孔板测试条添加10微升酶-抗体结合物至990微升1倍稀释液中,计算每个微孔板测试条所需的工作结合物溶液量。均匀但轻柔地混合。避免起泡。
4. 显色底物溶液
按供应状态直接使用。
5. 终止液
按供应状态直接使用。
6. 抗犬α1-抗胰蛋白酶ELISA微孔板
按供应状态直接使用。揭开微孔板袋封口,从袋中取出板。取出在测定中不会使用的所有条和孔,放回袋中并重新密封。
7. 犬α1-抗胰蛋白酶校准品
犬A1AT校准品应分装并冷冻保存。校准品现在的浓度为2.336毫克/毫升。犬A1AT标准品需要在立即使用前准备(见下表)。每步之间充分混合。避免起泡。
ALPCO产品种类多样,可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等,涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域,尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。
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