ALPCO 骨钙素（完整）ELISA的生物活性和样品收集方案

骨钙素（完整）ELISA是一种用于定量测量的免疫酶测定法血清中完整的人骨钙素（OST）。仅供研究使用。不用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品骨钙素（完整）ELISA。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

骨钙素（完整）ELISA检测原理：

骨钙素（完整型）酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种在易碎的微孔板（microtiterplates）上进行的固相酶放大灵敏度免疫测定。该测定使用针对人骨钙素不同表位的单克隆抗体（MAbs）。校准品和样品与涂覆在微孔板上的捕获单克隆抗体（MAb 1）以及与辣根过氧化物酶（HRP）标记的单克隆抗体（MAb 2）反应。经过一段时间的孵育，形成夹心结构：涂覆的MAb 1 - 人骨钙素 - MAb 2 - HRP，然后洗涤微孔板以去除未结合的酶标记抗体。通过显色反应测量结合的酶标记抗体。添加显色溶液（TMB即用型）并进行孵育。通过添加终止液来停止反应，然后读取微孔板在适当波长下的吸光度。通过测量吸光度来比色测定底物转化量，该吸光度与骨钙素浓度成正比。

绘制校准曲线，并通过校准曲线插值确定样品中骨钙素的浓度。

生物活性：

骨钙素或骨Gla蛋白（B.G.P）是骨基质的主要非胶原蛋白

分子量为5800Da并且含有49个氨基酸。骨钙素是由成骨细胞在骨中合成的。之后

在生产过程中，它部分被纳入骨基质，其余部分则存在于血液循环中。

骨钙素的确切生理功能尚不清楚。大量研究表明

骨钙素的循环水平反映了骨形成的速度。

试剂准备：

1. 校准品：用1.0毫升蒸馏水重悬零校准品和其他校准品。

2. 控制品：用1.0毫升蒸馏水重悬控制品。

3. 工作用抗骨钙素-HRP结合物：通过向2毫升结合物缓冲液中加入40微升浓缩的抗骨钙素-HRP结合物来准备足够的结合物溶液。使用漩涡混合器混合均匀。使用前立即准备。

4. 工作洗涤液：通过向1体积的洗涤液（200倍）中加入199体积的蒸馏水来准备足够的1倍工作洗涤液。使用磁力搅拌器混合均匀。当天结束时丢弃未使用的1倍工作洗涤液。

试剂的储存和有效期：

? 在开封或重悬之前，如果储存在2-8°C的环境中，所有试剂组分在瓶签上标明的有效期前都是稳定的。

? 未使用的孔必须储存在2-8°C的环境中，并放在含有干燥剂的密封袋中，直到有效期。

? 重悬后，校准品和控制品非常不稳定，重悬后立即使用。对于更长时间的储存，应分装并在-20°C下保存，最长不超过6周。使用后立即冷冻，不要等到所有样品都移液后再冷冻。避免后续的冻融循环。

? 浓缩洗涤液在常温下直到有效期前都是稳定的。

? 新鲜配制的1倍工作洗涤液应在当天内使用。

? 第一次使用后，如果储存在原始密闭瓶中2-8°C的环境中，浓缩结合物在有效期前是稳定的。

? 如果试剂组分的物理外观发生变化，可能表明不稳定或变质。

样品收集和准备：

? 通过静脉采血，注意避免溶血；样品必须保存在冰浴中。在3小时内将血清与细胞分离，推荐使用冷藏离心机。离心后立即向血清中加入100微升的Trasylol?（10000 IU/mL）（以获得每毫升样品1000 IU Trasylol?）。

? 经过这种处理后，样品在2-8°C下稳定3天。如果需要更长时间的延迟，样品必须冷冻（-20°C），但样品只能解冻一次！对于重复测试，应分装冷冻样品，并在第一次解冻后丢弃每个样品。

? 不要使用溶血或脂血的样品。

文献参考：

1. J.P. BROWN, P.D. DELMAS and al. (May 19, 1984)."Serum BGP: a specific marker for bone formation in postmenopausal osteoporosis". The Lancet, 1091-1093.

2. P.A. PRICE. (1985). "Vitamin K-dependent formation of osteocalcin and its function".Vitamins and hormones, 42,65-108.

3. R.E. COLEMAN, G. MASHITER and al. (1988). "Osteocalcin: a potential marker of metastatic bone disease and response to treatment".Eur. J. Cancer Clin. Oncol., 24,1211-1217.

4. S. MINISOLA and al. (1988). "Serum osteocalcin in primary hyperparathyroidism: shortterm effect of surgery". Mineral Electrolyte Metab., 14,201-207.

5. L.A. COULTON, C.J. PRESTON and al. (1988). "An evaluation of serum osteocalcin in Paget's disease of bone and its response to diphosphonate treatment". Arthritis and Rheumatism, 31,9,1142-1147. 

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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