ALPCO 游离25OH维生素D ELISA：提高96孔板分析的准确性和可靠性

DIAsource Free 25OH维生素D ELISA是一种体外诊断医疗器械，旨在供医疗保健专业人员使用用于定量测定人血清中游离的25OH维生素D，可用于筛查和监测目的。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品游离25OH维生素D ELISA, 96孔。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

游离25OH维生素D ELISA, 96孔检测原理：

游离25OH维生素D ELISA基于在微孔板中进行的两步免疫测定程序。在第一次孵育步骤中，游离的25OH维生素D[25(OH)维生素D2和D3]与微孔板孔中涂覆的抗维生素D抗体结合。体内游离和结合的25OH维生素D之间的平衡受到最小的干扰。洗涤后，向每个孔中加入固定量的生物素标记的25OH维生素D。通过洗涤去除未结合的生物素标记的25OH维生素D，然后加入链霉亲和素过氧化物酶结合物。在下一步中加入TMB显色底物。最后，通过加入停止试剂来停止反应，并使用板式分光光度计测量吸光度[A450nm]。样本中游离25OH维生素D（pg/ml）的浓度与每个样本孔中的吸光度成反比。

未提供的耗材

以下材料需要使用，但试剂盒中未提供：

A. 蒸馏水

B. 校准为递送的移液管：10 ?l, 35 ?l - 250 ?l, 3500 ?l - 5000 ?l（推荐使用带有一次性塑料吸头的精确移液管）。

C. 涡旋混合器

D. 37°C、650 rpm的板式摇床孵化器

E. 微孔板洗涤器

F. 能够读取450 nm和650 nm（双色读数）的微孔板读取器

试剂准备

使用前至少30分钟将所有试剂放置在室温（18-25°C）下。

A. 校准品：用250 ?l蒸馏水重组校准品，让它们在室温（18-25°C）下静置15分钟。重组后，充分混合，确保所有冻干物料都已重组。

B. 对照品：用250 ?l蒸馏水重组对照品。让它们在室温（18-25°C）下静置15分钟。重组后，充分混合，确保所有冻干物料都已重组。

C. 工作洗涤液：根据使用的条数，将1片洗涤缓冲片溶解在500 ml蒸馏水中，或2片洗涤缓冲片溶解在1L蒸馏水中。确保所有盐晶体都已溶解。

D. 工作生物素-维生素D溶液：根据使用的条数，将100倍浓缩的生物素-维生素D试剂与生物素-维生素D稀释液混合，以制备适量的工作稀释液，如下表所示：例如，对于6条（48孔）：将60 ?l 100倍浓缩的生物素-维生素D试剂加入6.0 ml生物素-维生素D稀释液中。

使用适当的聚丙烯容器进行配制。

生物素-维生素D溶液的配制不稳定，如果没有使用必须丢弃。

文献参考：

1. BOUILLON R. (2016), Free 25-hydroxyvitamin D: impact of vitamin D binding protein assays on racial genotypic associations, JCEM,http://dx.doi.org/10.1210/jc.2016-1104.

2. SOLLID S.T. (2016), Effects of vitamin D binding protein phenotypes and vitamin D supplementation on serum total 25(OH) D and directly measured free 25(OH)D, Eur. J. Endocrinol. April 1, 174:445-452.

3. TANGPRICHA V. (2015), Free 25-Hydroxyvitamin D Concentrations in Cystic Fibrosis, Am. J. Med. Sci. 2015 Nov;350(5):374-9.

4. ALOIA J. (2015), Free 25(OH)D and the Vitamin D Paradox in African Americans, J. Clin. Endocrinol. Metab. 2015 Jul 10:JC20152066.

5. SCHWARTZ J.B. (2014), A comparison of direct and calculated free 25(OH)Vitamin D levels in clinical populations, J. Clin. Endocrinol. Metab.,99(5):1631-7.

6. BIKLE D. (2013), Variability in free 25(OH) vitamin D levels in clinical populations, J. Steroid Biochem. Mol. Biol., S09600760.

7. BIKLE D., Gee E, Halloran B, Haddad JG. Free 1,25-dihydroxyvitamin D levels in serum from normal subjects, pregnant subjects, and subjects with liver disease. J Clin Invest 1984;74:1966–71.

8. VAN HOOFF H.J., Swinkels LM, Ross HA, Sweep CG, Benraad TJ. Determination of non-protein-bound plasma 1,25-dihydroxyvitamin D by symmetric (rate) dialysis. Anal Biochem. 1998 May 1;258(2):176-83.

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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