ALPCO 25OH维生素D总ELISA 试剂准备方案

25OH维生素D总ELISA试验旨在定量测定25-人血清和肝素血浆中的羟基维生素D2和D3（25-OH D2和25-OH D3）。For in美国的体外诊断应用。研究仅在其他地区使用。这些结果将与其他临床和实验室结果结合使用，以评估患者的维生素D状况。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品25OH维生素D总ELISA。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

25OH维生素D总ELISA检测原理：

25OH维生素D总量ELISA是一种在微孔板中进行的固相酶联免疫吸附测定。在最初的2小时室温孵育步骤中，校准品、对照品和样本中存在的总25-OH维生素D（D2和D3）从结合血清蛋白中解离，固定在特定单克隆抗体的结合位点上。经过初次洗涤步骤后，固定量的25-OH维生素D（与生物素标记并存在辣根过氧化物酶HRP中）与特定单克隆抗体结合位点上的未标记25-OH维生素D2和25-OH维生素D3竞争。经过30分钟的室温孵育后，对微孔板进行洗涤以停止竞争反应。加入显色溶液（TMB）并孵育15分钟。通过添加停止溶液来停止反应，然后在读板仪上读取相应波长。通过测量吸光度来比色测定底物转化量，该吸光度与总25-OH维生素D（D2和D3）浓度成反比。

通过绘制校准曲线，并从校准曲线上通过剂量插值确定样本中总25-OH维生素D（D2和D3）的浓度。

试剂准备:

1. 校准品0：用1毫升蒸馏水重组校准品0。

2. 校准品1-5：用1毫升蒸馏水重组校准品1-5。

3. 对照品：用1毫升蒸馏水重组对照品。

4. 工作洗涤液：通过向1体积的洗涤液（200倍）中加入199体积的蒸馏水，制备足够的1倍工作洗涤液。使用磁力搅拌器使其均匀。在当天结束时丢弃未使用的1倍工作洗涤液。

5. 工作HRP结合物溶液：

在样本孵育期间以及至少在其使用前1小时45分钟制备1倍工作HRP结合物溶液。

按照以下顺序混合3种试剂，制备足够的工作HRP结合物溶液：

(1) 结合物缓冲液，(2) 浓缩结合物，(3) 涡旋混合，(4) 浓缩HRP，(5) 涡旋混合

这3种试剂的添加顺序至关重要，必须严格遵循以获得可重复的光密度。

根据下表所示的使用的条数，制备溶液：例如，对于6条（48孔）：130?L的浓缩结合物和65 ?L的浓缩HRP加入到13 mL的结合物缓冲液中。使用涡旋混合器使其均匀。

在其使用前，将1倍工作HRP结合物置于室温下，并避免直接日光或使用棕色玻璃瓶进行其准备。

1倍工作HRP结合物不稳定，如果没有使用必须丢弃。

文献参考：

1. If the results obtained for Control 1 and/or Control 2 are not within the range specified on the vial label, the results cannot be used unless a satisfactory explanation for the discrepancy has been given.

2. If desirable, each laboratory can make its own pools of control samples, which should be kept frozen in aliquots. Controls which contain azide will interfere with the enzymatic reaction and cannot be used.

3. Acceptance criteria for the difference between the duplicate results of the samples should rely on Good Laboratory Practices.

4. It is recommended that Controls be routinely assayed as unknown samples to measure assay variability. The performance of the assay should be monitored with quality control charts of the controls.

5. Visually check the curve generated by the computer program for accuracy. 

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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