ALPCO 抗Sm/RNP-C（IgG）ELISA检测原理&步骤

抗Sm/RNP-C（IgG）ELISA是一种固相酶免疫测定法，用于定量和人血清中抗snRNP复合物抗体的定性检测。该测定采用从细胞系HeLa高度纯化的天然人U1 snRNP复合物。这个U1 snRNP复合物包含Smith抗原（Sm）和RNPs，70 kDa U1特异性蛋白加上蛋白质A和C。该检测是研究混合结缔组织疾病的工具（MCTD）和系统性红斑狼疮（SLE）。仅供研究使用。不用于诊断程序。

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抗Sm/RNP-C（IgG）ELISA检测原理：

血清样本稀释至1:101后，在涂有特定抗原的微孔板中孵育。

如果样本中存在抗体，它们会与抗原结合。未结合的部分在随后的步骤中被洗掉。

然后，与辣根过氧化物酶（HRP）结合的抗人免疫球蛋白孵育，并与微孔板中样本的抗原-抗体复合体反应。

未结合的结合物在随后的步骤中被洗掉。加入TMB底物会产生酶促比色（蓝色）反应，通过稀释酸停止反应（颜色变为黄色）。

色素的色度形成速率是与抗原-抗体复合体结合的结合物的量的功能，这与样本中相应抗体的初始浓度成正比。

储存和保质期

将所有试剂和微孔板存放在2-8°C/35-46°F的条件下，使用原装容器。一旦配制好，重组溶液在2-8°C/35-46°F下稳定1个月。试剂和微孔板应在每个组件上标明的有效期内使用。避免TMB底物强烈暴露于光线下。将微孔板存放在指定的铝箔中，包括干燥剂，并密封紧固。

样本收集、处理和储存

最好使用新鲜收集的血清样本。采血必须遵循国家要求。不要使用黄疸、脂血、溶血或细菌污染的样本。含有颗粒的血清应通过低速离心（<1000 xg）清除。血液样本应收集在干净、干燥、空的试管中。

分离后，血清样本应在最初的8小时内使用，或在2-8°C/35-46°F下紧闭存放最多两天（48小时），或在-20°C/4°F下冷冻保存更长时间。

检测步骤

1. 在移液之前确保已完成步骤7.1的准备工作。

2. 根据所需的定量/定性结果，按照以下步骤操作：

3. 按照第7.2节的描述，将100 ?L的以下物质移入指定的微孔中：

a. 校准品（Cal A至Cal F）用于定量或

b. 截止校准品（CC）用于定性

以及以下每种100 ?L：

c. 阴性对照（NC）和阳性对照（PC）

d. 稀释的血清样本（S1, S2…）

4. 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分钟。

5. 用300 ?L的洗涤缓冲液（稀释1:50）洗涤3次。

6. 向每个孔中移入100 ?L的结合物。

7. 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分钟。

8. 用300 ?L的洗涤缓冲液（稀释1:50）洗涤3次。

9. 向每个孔中移入100 ?L的TMB底物。

10. 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分钟，避免强烈光线照射。

11. 按照加入底物的相同顺序，向每个孔中移入100 ?l的终止溶液。

12. 至少孵育5分钟。

13. 轻轻摇动板子5秒钟。

14. 在30分钟内读取450 nm（可选450/620 nm）的吸光度。

文献参考：

1. Peter JB, Shoenfeld Y (1996). Autoantibodies. Elsevier. Sciences B.V., Amsterdam.

2. Hackl W, Fischer U, Luhrmann R (1994). A 69 kD protein that associates reversibly with the Sm core domain of several splicosomal snRNP species. J Cell Biol 124: 261-272.

3. Klein Gunnewiek JMT, Van de Putte LBA, van Venrooij WJ (1997). The U1 snRNP complex: An autoantigen in connective tissue diseases: An update. Clin Exp Rheumatol 15: 549-560.

4. Von Mühlen CA, Tan EM (1995). Autoantibodies in the diagnosis of systemic rheumatic diseases. Semin Arthritis Rheum 24: 323-358. 

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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