ALPCO 抗可溶性肝抗原(SLA) - IgG EIA(96孔)，高精度96孔EIA技术

抗SLA ELISA是一种使用人重组SLA/LP的固相酶免疫测定法用于定量和定性检测人类可溶性肝抗原（SLA）抗体血清。

该检测是诊断自身免疫性肝炎（AIH）的工具。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品抗可溶性肝抗原(SLA) - IgG EIA(96孔)。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

抗可溶性肝抗原(SLA) - IgG EIA(96孔)应用和检测原理：

自身免疫性肝炎（AIH）是一种慢性进行性肝病，其起源未知，对免疫抑制治疗反应良好，但如果不治疗则预后不佳。因此，早期和准确的诊断非常重要。AIH的特点是缺乏病毒标志物的情况下，组织学上表现为周围门脉性肝炎，高γ球蛋白血症，以及大多数患者血清中存在自身抗体。70%的患者有显著滴度的抗核抗体（ANA）、平滑肌自身抗体（SMA）或肝肾微粒体自身抗体（LKM）。这些抗体对AIH具有诊断价值，但并不特异于该疾病，因为它们也出现在10-15%的病毒性肝炎和其他免疫介导疾病的患者中。相比之下，针对可溶性肝抗原（SLA）和肝胰抗原（LP）的抗体是唯一特异于自身免疫性肝炎的，存在于20%的所有AIH患者中，其中许多患者对其他自身抗体呈阴性。研究表明，抗-SLA和抗-LP针对的是相同的抗原，因此是相同的。2000年克隆和测序的SLA/LP抗原是一种未知功能的蛋白质，被认为是一种UGA-抑制剂tRNA相关蛋白。

ANA/SMA和抗-SLA阳性患者在大多数临床、生化、组织学和预后特征上是共享的。因此，根据自身抗体状态区分不同的亚组在临床上并没有帮助。然而，对于许多对其他自身抗体呈阴性的患者来说，检测抗-SLA自身抗体对于AIH的诊断非常重要，否则可能会被误诊。

试剂盒组成：

需要重新配制的：

5倍样本缓冲液1瓶，20毫升 - 5倍浓缩（白色瓶盖：黄色溶液）

成分：Tris, 氯化钠（NaCl）, 牛血清白蛋白（BSA）, 叠氮化钠 < 0.1%（防腐剂）

50倍洗涤缓冲液1瓶，20毫升 - 50倍浓缩（白色瓶盖：绿色溶液）

成分：Tris, 氯化钠（NaCl）, 吐温20, 叠氮化钠 < 0.1%（防腐剂）

即用型：

阴性对照1瓶，1.5毫升（绿色瓶盖：无色溶液）

成分：人血清（稀释）, 叠氮化钠 < 0.1%（防腐剂）

阳性对照1瓶，1.5毫升（红色瓶盖：黄色溶液）

成分：人血清（稀释）, 叠氮化钠 < 0.1%（防腐剂）

截止校准液1瓶，1.5毫升（蓝色瓶盖：黄色溶液）

成分：人血清（稀释）, 叠氮化钠 < 0.1%（防腐剂）

校准液6瓶，每瓶1.5毫升，浓度分别为0, 3, 10, 30, 100, 300 U/ml

（颜色随浓度增加而加深：黄色溶液）

成分：人血清（稀释）, 叠氮化钠 < 0.1%（防腐剂）

结合物1瓶，15毫升IgG（蓝色瓶盖：蓝色溶液）

成分：与辣根过氧化物酶结合的抗人免疫球蛋白

TMB底物1瓶，15毫升（黑色瓶盖）

成分：稳定的TMB/H2O2

停止液1瓶，15毫升（白色瓶盖：无色溶液）

成分：1M盐酸

微孔板12x8孔条，带有可拆卸的微孔

涂覆请参见第1段。

检测程序

移液前的准备

稀释浓缩试剂：

将浓缩样本缓冲液按1:5的比例用蒸馏水稀释（例如20毫升加80毫升）。

将浓缩洗涤缓冲液按1:50的比例用蒸馏水稀释（例如20毫升加980毫升）。

样本：

将血清样本按1:101的比例用样本缓冲液（1倍）稀释

例如：1000微升样本缓冲液（1倍）+ 10微升血清。充分混合！

洗涤：

每8个孔准备20毫升稀释洗涤缓冲液（1倍），或每96个孔准备200毫升

例如：4毫升浓缩液加196毫升蒸馏水。

自动洗涤：

考虑设置仪器和机器人移液器死体积所需的额外体积。

手动洗涤：

将孔中的液体倒空，然后将微孔板倒置在干净的吸水纸上，用力敲击以去除液体。向每个孔中加入300微升稀释洗涤缓冲液，等待20秒。重复整个程序两次。

微孔板：

计算测试所需的孔数。从框架中移除未使用的孔，放回提供的塑料袋中，与干燥剂一起密封（2-8°C/35-46°F）。

工作流程

有关移液方案，请参见附录A，有关测试程序，请参见附录B

我们建议对样本和校准液进行双重移液。

截止校准液仅用于定性测试。

● 将100微升每位患者的稀释血清移入指定的微孔中。

● 将100微升校准液或截止校准液以及阴性和阳性对照移入指定的孔中。

● 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分钟。

● 用300微升稀释洗涤缓冲液（1:50）洗涤3次。

● 向每个孔中加入100微升结合物。

● 在20-32°C/68-89.6°F下孵育30分钟。

● 用300微升稀释洗涤缓冲液（1:50）洗涤3次。

● 向每个孔中加入100微升TMB底物。

● 在20-32°C/68-89.6°F下，避免强烈光线照射，孵育30分钟。

● 按照加入底物的相同顺序，向每个孔中加入100微升停止液。

● 孵育至少5分钟。

● 轻轻摇动板子5秒钟。

● 在30分钟内读取450纳米（可选450/620纳米）处的吸光度。

文献参考：

1.KrawittEL(1996).

AutoimmuneHepatitis.

NEnglJMed334:897-903.

2.MeyerzumBüschenfeldeKH,LohseAW(1995).

AutoimmuneHepatitis.

NEnglJMed333:1004-1005.

3.AlvarezF,BergPA,Bianchietal.(1999).

InternationalAutoimmuneHepatitisGroupReport:areviewofcriteriafordiagnosisofauto-

immunehepatitis.

JHepatol31:929-938.

4.CostaM,Rodriguez-SanchezJL,CzajaAJ,GelpiC(2000).

IsolationandcharacterizationofcDNAencodingtheantigenicproteinofthehumantRNP(Ser

Sec)complexrecognizedbyautoantibodiesfrompatientswithtype-1hepatitis.

ClinExpImmunol121:364-374.

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。