ALPCO CeliCheck（组织转谷氨酰胺酶IgA/IgG）ELISA测定程序说明

CeliCheck（组织转谷氨酰胺酶IgA/IgG）ELISA是一种固相酶免疫测定法，用于定量和定性检测人血清中针对组织转谷氨酰胺蛋白酶（tTG）新表位的IgA和IgG抗体。采用与醇溶蛋白特异性肽交联的人重组tTG的检测显示了tTG的新表位，这确保了检测的分析灵敏度和特异性显著提高。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品CeliCheck（组织转谷氨酰胺酶IgA/IgG）ELISA。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

CeliCheck（组织转谷氨酰胺酶IgA/IgG）ELISA检测原理：

将1:101稀释的血清样本在涂有特异性抗原的微孔板中孵育。样本中的抗体与抗原结合。在以下步骤中洗掉未结合的部分。然后，将与辣根过氧化物酶结合的抗人免疫球蛋白孵育，并与微孔板中样品的抗原-抗体复合物反应。在接下来的步骤中洗掉未结合的共轭物。添加TMB底物会产生无酶比色（蓝色）反应，该反应被稀酸阻止（颜色变为黄色）。发色团颜色形成的强度是结合到抗原-抗体复合物上的结合物的量的函数，这与样品中相应抗体的初始浓度成正比。

测定程序

1 开始前的准备

试剂准备：

稀释浓缩试剂：

- 将浓缩样本缓冲液按1:5的比例用蒸馏水稀释（例如20毫升加80毫升）。

- 将浓缩洗涤缓冲液按1:50的比例用蒸馏水稀释（例如20毫升加980毫升）。

为避免错误，建议标记不同校准液的瓶盖。

样本准备：

将血清样本按1:101的比例用样本缓冲液（1x）稀释，例如1000微升样本缓冲液（1x）+ 10微升血清。

混合均匀！

洗涤：

- 每8个孔准备20毫升稀释洗涤缓冲液（1x），或96孔则准备200毫升，例如4毫升浓缩液加196毫升蒸馏水。

自动洗涤：

- 考虑设置仪器和机器人移液管死体积所需的额外体积。

手动洗涤：

- 将孔中的液体倒置板子倒掉。将微孔板框架孔朝下在干净的吸水纸上用力敲击。

- 向每个孔中移液300微升稀释洗涤缓冲液，等待20秒。再次重复整个程序两次。

微孔板：

- 计算测试所需的孔数。从框架中移除未使用的孔，放回提供的塑料袋中，与干燥剂一起密封存放（2-8°C/35-46°F）。

使用通用指南

如果产品信息（包括标签）有缺陷或错误，请联系ALPCO。不要混合或替换不同批号的对照品、校准液、结合物或微孔板。这可能会导致结果变化。使用前让所有组分达到室温（20-32°C/68-89.6°F），混合均匀，并遵循推荐的孵育方案以获得最佳测试性能。孵育：建议在30°C/86°F下进行自动化系统的测试。不要将组分暴露在高于37°C/98.6°F的温度下。始终使用全新的移液管头吸取底物溶液。保护这种试剂不受光线照射。永远不要使用与其他试剂一起使用过的移液管头吸取结合物。

样本收集、处理和储存

优先使用新鲜收集的血清样本。采血必须遵循国家要求。不要使用溶血、脂血、黄疸或细菌污染的样本。含有颗粒的血清应通过低速离心（<1000 xg）清除。血液样本应收集在干净、干燥、空的试管中。分离后，血清样本应在最初8小时内使用，或紧闭存放在2-8°C/35-46°F下最多48小时，或在-20°C/-4°F下冷冻以保存更长时间。

文献参考：

1. Dietrich W, Ehnis T, Bauer M, Donner P, Volta U, Riecken EO, Schuppan D (1997).Identification of tissue transglutaminase as the autoantigen of celiac disease. Nat Med1997; 3: 797-801.

2. Dietrich W, Laag E, Sch?pper H, Volta U, Ferguson A, Gillett H, Riecken EO, SchuppanD (1998). Autoantibodies to tissue transglutaminase as predictors of celiac disease.Gastroenterology 1998; 115: 1317-1321.

3. M?ki M, Collin P (1997). Coeliac disease. Lancet 1997 349: 1755-1759.4. Shan L, Molberg O, Parrot I, Hausch F, Filiz F, Gray GM, Sollid LM, Khosla C (2002).Structural basis for gluten intolerance in Celiac Sprue. Science 297: 2275-2279.

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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