ALPCO 总甲状腺素ELISA（总T4 ELISA）：提高检测准确性和重复性的策略

用于定量测定人血清中总甲状腺素（T4）浓度。仅供研究使用。不用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品 总甲状腺素ELISA（总T4 ELISA）。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

 总甲状腺素ELISA（总T4 ELISA）检测原理：

在T4酶免疫测定（EIA）中，微孔板孔上包被了一定量的抗T4抗体。将一定量的样本和一定量的与辣根过氧化物酶结合的T4添加到微孔板孔中。在孵育过程中，T4和结合的T4竞争抗T4抗体上的有限结合位点。在室温下孵育60分钟后，用水润洗孔5次以去除未结合的T4结合物。然后加入TMB试剂溶液并孵育20分钟，导致蓝色出现。通过加入停止溶液停止颜色发展，然后在450nm处用分光光度计测量吸光度。形成的色度强度与存在的酶量成正比，与样本中未标记T4的量成反比。通过参考以同样方式测定的一系列T4标准品，可以定量未知样本中T4的浓度。

测定程序

1. 将所需数量的包被孔固定在支架中。

2. 将25?L的标准品、样本和对照品（未包含）移液至相应的孔中。

3. 向每个孔中加入100 ?L的工作结合试剂。

4. 彻底混合30秒。完全混合非常重要。

5. 在室温（18-25°C）下孵育60分钟。

6. 将孵育混合物通过甩动板子内容物到废物容器中移除。

7. 用蒸馏水冲洗微孔板5次，并甩动。

8. 将孔猛击在吸水纸或纸巾上，以去除所有残留水滴。

9. 向每个孔中分发100?L的TMB试剂。轻轻混合10秒。

10. 在室温下，避光孵育20分钟。

11. 通过向每个孔中加入100?L的停止溶液来停止反应。

12. 轻轻混合30秒。确保所有的蓝色完全变为黄色。

13. 在15分钟内使用微孔板读取器读取450nm的吸光度。

结果计算

1. 计算参考标准、对照品和样本的重复组的平均吸光度值（OD450）。

2. 通过在对数-对数坐标纸上绘制每个参考标准的平均吸光度与其浓度（?g/dL）的标准曲线，吸光度在垂直（y）轴上，浓度在水平（x）轴上。

3. 使用每个样本的平均吸光度值，从标准曲线上确定相应的T4浓度（?g/dL）。

标准曲线示例：

下面展示了一个典型的标准运行结果，其中450纳米处的光密度读数显示在Y轴上，而总T4浓度（?g/dL）显示在X轴上。注意：标准曲线仅供说明之用，不应用来计算未知值。每个实验室必须为每次测定运行提供自己的数据和标准曲线。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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