ALPCO 耐药超敏EIA(96孔)，用于高效评估临床样本中的抗药性水平

Resistin，一种富含半胱氨酸的11.3 kDa蛋白质（1），最初在小鼠中被发现（2），与RELM、RELMβ和RELM一起构成抗素样分子（RELM）蛋白家族。在人类中，只发现了resistin和RELMβ（1），但没有发现RELM家族的其他蛋白质。人类resistin与小鼠蛋白的同源性为53%（4）。它含有11个半胱氨酸残基，作为108个氨基酸的前体合成，并以二聚体形式分泌，具有半胱氨酸残基的二硫键。除了这个分子间的二硫键，还存在5个额外的分子内二硫键。通过尺寸排除色谱法证明了多聚体和寡聚体的形成。由此表明，寡聚体的形成对SDS不敏感，但可以被β巯基乙醇抑制，因此可能是由二硫键引起的（1）。此外，resistin结构似乎还取决于浓度，因为圆二色谱分析显示了从α-螺旋到β-折叠结构的浓度依赖性转变（1）。已在小鼠的白色脂肪组织、垂体和胰岛以及大鼠的棕色脂肪组织中证明了resistin的表达。在人类中，可以在脂肪细胞中检测到resistin的表达，但仅在非常低的水平。然而，在体外已显示非脂肪细胞的脂肪组织中resistin的表达。人类resistin基因也在胰岛、前脂肪细胞、巨噬细胞和骨髓中表达。因此，resistin与炎症过程以及脂质代谢相关。大多数研究涉及小鼠模型。在这里，证明了血清中三聚体和六聚体resistin的存在。与脂联素生物学相比，不同的resistin寡聚体具有不同的生物学功能是非常可能的。在小鼠中，经验性地发现了脂肪性、胰岛素抵抗和resistin表达之间的相关性。在人类中，研究结果并不明确——一些研究显示resistin血清浓度与脂肪性或胰岛素抵抗相关。但其他研究未能证实这些结果。因此，需要有效和可重复的测定resistin血清浓度。resistin在能量代谢之外的生理过程中的相关性已通过几种不同的方法进行了研究。与内皮细胞的实验给出了有趣的结果。在这里，resistin被证明可以增强VCAM-1和ICAM-1的表达。因此，resistin可能能够影响内皮炎症，从而影响动脉粥样硬化。这些结果通过在小鼠中的实验得到了验证，在那里内皮素-1被证明可以调节resistin的分泌。在最近的研究中，人类resistin被证明可以增加前脂肪细胞的增殖和成熟脂肪细胞的脂解。通过调节MAPK信号传导途径，resistin对能量代谢施加关键影响。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品耐药超敏EIA(96孔)。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

耐药超敏EIA(96孔)检测原理：

抵抗素的酶免疫测定是一种所谓的夹心法。它利用了一种涂在微量滴定板孔上的特异性高亲和力多克隆兔抗血清。样品中的抵抗素与固定化抗血清定量结合。在接下来的步骤中，生物素化的检测试剂依次与抵抗素结合。洗涤后，加入链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶-酶偶联物，并与结合的检测抗体上的生物素结合。在封闭底物反应中，颜色变化将根据样品的抵抗素水平定量催化。

样本

1 样本类型

血清和血浆样本均适用。在相应的血清、肝素血浆、EDTA血浆和柠檬酸血浆样本中未发现resistin水平的显著偏差。必须考虑抗凝剂可能对样本造成的稀释。通过特殊的样本缓冲液，测定前不需要外部样本准备（见下文）。

2 样本收集

血清制备的血液样本应按照标准化的静脉穿刺程序获取。样本应无抗凝剂储存。必须避免溶血。血液必须凝固，并且在完全凝固后，通过离心分离出血清。

3 所需样本体积：15 ?L

4 样本储存

在紧闭的塑料管中储存。

- 在20 - 25 °C下最多储存2天

- 在–20°C下最少储存2年

在–20°C下储存样本2年以上对测量值无影响。应尽量减少样本的冻融循环。

5 干扰

在100mg/mL、100 ?g/mL和1 mg/mL的浓度下分别测试了样本中的甘油三酯、胆红素和溶血产物。溶血样本似乎会显示错误的高resistin水平，应批判性地检查使用此类样本。用户应验证使用溶血、脂血或黄疸样本。

6 血清和血浆样本稀释

稀释：1:21与样本缓冲液（SB）。

在PE/PP管中移液300 ?L样本缓冲液SB（在大量系列中推荐使用多步移液器），加入15 ?L血清或血浆样本（稀释1:21）。混合后，可以使用两个100 ?L样本在测定中双重评估样本。根据预期的resistin水平，可能需要调整稀释比例。样本可以稀释在1:5到1:400之间。样本缓冲液的配方是为了允许正确测定resistin。建议样本至少用样本缓冲液稀释1:5！

文献参考：

1. Aruna B, Ghosh S, Singh AK, Mande SC, Srinivas V, Chauhan R, Ehtesham NZ. Humanrecombinant resistin protein displays a tendency to aggregate by forming intermoleculardisulfide linkages. Biochemistry 2003;42(36):10554-9.

2. Steppan CM, Lazar MA. Resistin and obesity-associated insulin resistance. Trends EndocrinolMetab 2002;13(1):18-23.

3. Yang RZ, Huang Q, Xu A, McLenithan JC, Eisen JA, Shuldiner AR, Alkan S, Gong DW, EisonJA. Comparative studies of resistin expression and phylogenomics in human and mouse.Biochem Biophys Res Commun 2003;310(3):927-35.

4. Banerjee RR, Lazar MA. Resistin: molecular history and prognosis. J Mol Med 2003;81(4):218-26.

5. Banerjee RR, Lazar MA. Dimerization of resistin and resistin-like molecules is determined by asingle cysteine. J Biol Chem 2001;276(28):25970-3

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。