ALPCO-瘦素（小鼠/大鼠）ELISA，高亲和力，精准检测

ALPCO-瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一种酶免疫测定试剂盒，适用于定量测定小鼠和大鼠血清或血浆中的瘦素，用于科学目的。仅供研究使用。不用于诊断程序。

艾美捷瘦素（小鼠/大鼠）ELISA（ALP-22-LEPMS-E01）检测原理：

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA是一种所谓的夹心法。它利用两种不同的特异性高亲和力多克隆抗体来治疗这种蛋白质。样本中的瘦素与固定化抗体定量结合。在接下来的步骤中，生物素化抗体又与瘦素结合。洗涤后，加入链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶偶联物，其对生物素具有高度特异性，并与抗体的生物素结合。随后，过氧化物酶催化酶反应，导致蓝色。蓝色的强度取决于样品的瘦素含量。通过加入终止溶液来终止反应，并通过测量吸收来量化颜色强度。

样本类型

适用于本检测的小鼠和大鼠血清以及肝素、EDTA或柠檬酸盐血浆是合适的样本类型。必须考虑抗凝剂可能导致的样本稀释。

样本收集

应避免溶血样本。

所需样本体积

根据样本的瘦素值，每个测试的最大样本体积为50微升。样本应根据预期值在使用前用稀释缓冲液（VP）进行稀释。

样本稳定性

未稀释的血清样本可在-20°C下冷冻保存，不会导致小鼠/大鼠瘦素的损失。尽管经过几次冻融循环后发现水平不受影响，但应避免反复冻融。稀释后的样本最多稳定2小时。

样本稀释

通常，1:5至1:20的样本稀释是合适的。根据物种、饲养和/或个别实验条件，这可能会有所不同。如果预期瘦素浓度非常低，可以使用1:2稀释的样本（甚至未稀释的样本）。然而，如果样本体积有限且瘦素浓度足够，可能需要更高倍数的稀释。

1使用稀释缓冲液VP进行1:5稀释。例如，对于一个双重测定，向PE/PP管中移液200微升稀释缓冲液VP（推荐使用多步移液管处理大量样本）；然后加入50微升样本（稀释1:5）。混合后，在检测中使用2 x 100微升的该稀释液。

2或者，向孔中移液80微升稀释缓冲液VP并加入20微升样本（混合均匀）。根据预期的瘦素值，可以使用稀释缓冲液VP进一步稀释样本。

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA检测程序

在进行检测时，空白对照、A-G标准品、KS对照品以及样本应尽可能快速地移液（例如，<15分钟）。为避免由于孵育时间差异导致的扭曲，抗体结合物AK、酶结合物EK以及随后的底物溶液S应以与样本相同的顺序和时间间隔加入到板中。停止液SL应以与底物溶液相同的顺序加入到板中。所有测定（空白对照、A-G标准品、KS对照品和样本）应以双份进行。为获得最佳结果，建议精确移液并严格遵守操作规程。

典型标准曲线示例：

以下数据仅供展示，不能替代在检测时生成的数据。

图1：标准曲线示例

图1中显示的标准曲线示例不能用于计算检测结果。每次进行检测时都必须建立标准曲线。

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA检测性能特点：

Leptin Mouse/Rat ELISA 使用两种高亲和力的多克隆抗体，这些抗体能够识别小鼠瘦素。标准品是由重组小鼠瘦素制备的。对大鼠瘦素的一定程度的交叉反应允许该试剂盒用于测量大鼠瘦素。研究发现，大鼠样本的稀释与小鼠样本一样呈线性。来自同一生产商的重组小鼠和大鼠瘦素的制备在该试剂盒的定量上进行了比较。基于生产商的名义声明，大鼠材料的相对效力被发现大约是小鼠材料的25%。使用大鼠样本工作时，建议用户对试剂盒的值进行校准。这种ELISA是参照WHO NIBSC小鼠瘦素标准97/626进行校准的（见上文）。与人类瘦素的交叉反应率为0.7%。

瘦素（小鼠/大鼠）ELISA文献参考：

1. Zhang Y, Proenca R, Maffei M, Barone M, Leopold L, Friedman JM. 1994 Positional cloning of themouse obese gene and its human homologue. Nature. 372:425-432.

2. Halaas JL, Gajiwala KS, Maffei M, et al. 1995 Weight-reducing effects of the plasma protein encodedby the obese gene. Science. 269:543-546.

3. MacDougald OA, Hwang CS, Fan H, Lane MD. 1995 Regulated expression of the obese geneproduct (leptin) in white adipose tissue and 3T3-L1 adipocytes. Proc Natl Acad Sci U S A. 92:9034-9037.

4. Rentsch J, Chiesi M. 1996 Regulation of ob gene mRNA levels in cultured adipocytes. FEBS Lett.379:55-59