ALPCO 抗HAV-ELISA定量检测原理，及定性测试分析方案

抗甲型肝炎ELISA是一种检测甲型肝炎抗体的酶免疫测定法人血清中的病毒。仅供研究使用。不用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品抗HAV-ELISA定量。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

抗HAV-ELISA定量检测原理：

Anti-HAV ELISA是一种伪竞争性酶免疫分析。血清或血浆样本被加入到预先涂有灭活HAV抗原的微孔板孔中，并在37°C下孵育2小时。Anti-HAV抗体与抗原结合。然后添加结合物（过氧化物酶标记的Anti-HAV）并再次在37°C下孵育1小时。抗原的自由结合位点与结合物结合。多余的结合物从板上洗去，然后添加底物并在室温下孵育30分钟。结合的结合物将底物的颜色变为蓝色。通过添加终止液来终止反应。颜色变为黄色。在微孔板读取器上测量有色反应产物的吸光度。吸光度与Anti-HAV滴度成反比。对于定量测定，使用所包含的血清标准来准备滴定曲线。

定性测试分析：

为了在人类血清样本中定性测定抗HAV抗体，产品开发过程中创建了一种方法，该方法能够以98.3%的灵敏度（n=801）区分阳性和阴性样本。为此，根据以下公式从阳性对照和阴性对照的信号计算出截止值：

截止值 = （阳性对照的平均吸光度 + 阴性对照的平均吸光度） / 2

平均吸光度值高于截止值的样本为阴性。

吸光度值低于截止值的样本为阳性。吸光度在截止值的±10%范围内的样本应重新测定。

表1显示了一个示例测试结果。阴性和阳性对照之间的吸光度差异大于0.4（1.390至0.24）。计算截止值的结果如下：

截止值 = (NK + PK) / 2 = 1.390 + 0.024 = 0.707

因此，截止值是0.707。这样，所有信号高于这个值的样本被归类为阴性（不含抗HAV抗体），所有信号低于0.707的样本被评估为阳性（含有抗HAV抗体）。

血清样本1的吸光度大于截止值，因此它是阴性的。血清样本2的吸光度小于截止值，因此它是阳性的。在血清样本3中，吸光度在0.778 - 0.636（±10%的0.707）的范围内，必须如上例所示重复测定。

表1：以定性抗HAV测定结果为例

测试有效，因为符合以下条件：

阴性对照（NK）和阳性对照（PK）之间的消光差>0.4

文献参考：

1) Flehmig, B.: Hepatitis A. Baillière`s Clinical Gastroenterology, Vol.4 No. 3, p. 707,1990.

2) Ambrosch, F. et al.: Comparison of HAV-Antibodies Induced by Vaccination,Passive Immunization, and Natural Infection. Viral Hepatitis and Liver Disease. S.98 (1990). (Editors: Hollinger, Lemon, Margolis, published by Williams and Wilkins, Baltimore; ISBN 0-683-04120-7).

3) Delem, A. et al.: Characterization of the immune response of volunteers vaccinated with a killed vaccine against hepatitis A. Vaccine, Vol. 11, Issue 4, S.479 (1993).

4) Heinricy, U. et al.: Schedule-dependent Immune Response to Hepatitis A Vaccination. Viral Hepatitis and Liver Disease. S. 108 (1990). (Editors: Hollinger,Lemon, Margolis, published by Williams and Wilkins, Baltimore; ISBN 0-683-04120-7).

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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