ALPCO IGFBP-3(生物活性)ELISA试剂盒，提供可靠和便捷的检测方案

测量IGFBP-3

目前所有的IGFBP-3免疫分析法都使用特定的抗IGFBP-3抗体的结合来产生信号，从而实现IGFBP-3的定量。在这个系统中，无法避免区分完整的IGFBP-3分子和它们各自的片段（由于不同蛋白酶活性生理性地产生）。因为一个IGFBP-3分子可以被切割成几个片段，所以经常测量到虚假的高定量值。基于这种方法，无法区分高IGFBP-3水平或高度片段化。尝试使用只由完整的IGFBP-3分子表示的结合区域的单克隆抗体是间接的、不精确的和不充分的，因为所有有效的蛋白酶的活动（它们有不同的作用位点，因此产生不同类型的片段）会被忽视。

然而，IGFBP-3（生物活性）ELISA能够确定功能性和生物活性的IGFBP-3；功能性是指与主要天然配体，即IGF-I的结合能力。新的测试原理（专利申请中DE19719001）使用固定在微孔板上的抗IGFBP-3抗体和生物素标记的IGF-I作为配体。样本中的IGFBP-3与微孔板结合，并且当同时被IGFBP-3结合时，生物素标记的IGF-I提供了测试的特定信号。因此，只有功能性IGFBP-3被定量。专利的测试格式确保了在简单的格式中的可靠性能，就像传统的ELISA试剂盒一样。先进且耗时和劳动密集型的生化分析（例如，通过尺寸色谱或西方印迹等）已经变得多余，这些分析方法也只能估计浓度。

该酶免疫测定试剂盒用于研究，可定量人血清、肝素血浆或脑脊液中的生物活性IGFBP-3。仅供研究使用。不用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品IGFBP-3(生物活性)ELISA试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

IGFBP-3(生物活性)ELISA试剂盒检测原理：

IGFBP-3（生物活性）ELISA利用固定在微孔板上的特异性和高亲和力的IGFBP-3抗体。配体，生物素标记的IGF-I预先以过量的方式分装在所需的孔中。样本用特殊的稀释液（样本缓冲液PP）稀释，从而释放所有自然结合的IGFs从其结合蛋白上。通过向含有配体的孔中加入含有游离IGFBP-3的稀释样本的等分，生物素标记的IGF-I占据了IGFBP-3的所有现有特定结合位点。通过使用链霉亲和素-过氧化物酶（POD）缀合物，只有IGFBP-3/生物素标记IGF-I的复合物参与信号产生（通过POD底物反应），因此，只有功能性IGFBP-3被定量。标准品由天然和功能性的人类IGFBP-3制成，浓度分别为0.4、2、6、15和30 ng/mL。

测定程序注意事项：所有测定（标准品、对照血清和样本）应以双份进行。为了获得最佳结果，建议准确移液并严格遵守操作规程。在进行测定时，应尽可能快地移液标准品、对照血清和样本（例如，<15分钟）。为了避免由于孵育时间差异导致的变异，酶结合物、底物溶液S以及终止液SL应分别按照相同的顺序和时间间隔添加到板中。

1) 请将配体结合物LK用稀释液VP稀释1:101（如果需要使用整个微孔板，可能需要4.8 mL，因此将60 ?L浓缩的LK与6 mL缓冲液VP稀释）。

2) 向每个孔中加入50 ?L已经稀释1:101的配体结合物LK。

3) 在A1/2位置（=空白孔）中加入50 ?L样本缓冲液PP。

4) 分别向B1/2位置中加入50 ?L标准品A（0.4ng/mL），向C1/2位置中加入50 ?L标准品B（2 ng/mL），向D1/2位置中加入50 ?L标准品C（6 ng/mL），向E1/2位置中加入50 ?L标准品D（15 ng/mL），向F1/2位置中加入50 ?L标准品E（30 ng/mL）。为了控制测试的正确执行，可以在G1/2和H1/2位置中分别加入50 ?L稀释的对照血清KS1和KS2（通常在样本缓冲液PP中稀释1:505）。

根据要求，在其余孔中分别加入50 ?L稀释后的样本（通常在样本缓冲液PP中稀释1:505）。请在样本加入后立即混合稀释液，并在60分钟内使用。

5) 用密封胶带覆盖孔，并在室温下孵育板2小时（350 rpm振荡）。

6) 孵育后，吸去孔内的内容物，并用300 ?L洗涤液WP洗涤孔5次。

7) 在最后一次洗涤步骤后，向每个孔中加入100 ?L已经稀释1:101的酶结合物EK（如果需要使用整个微孔板，可能需要9.6 mL，因此可以将120 ?L浓缩的EK与12 mL缓冲液VP稀释）。

8) 用密封胶带覆盖孔，并在室温下孵育1小时（350 rpm振荡）。

9) 孵育后，按照步骤6的描述，用洗涤液WP洗涤孔5次。

10) 向每个孔中加入100 ?L TMB底物溶液S。

11) 在室温下黑暗中孵育板30分钟。

12) 孵育后，向每个孔中加入100 ?L终止液SL。

13) 在30分钟内测量450 nm处的吸光度（参考滤光片≥ 590 nm）。

文献参考：

1) Ballard J, Baxter R, Binoux M, Clemmons D, Drop S, Hall K, Hintz R, Rechler M, Rutanen E, Schwander J(1989) On the nomenclature of the IGF binding proteins. Acta Endocrinol (Copenh) 121:751-752

2) Wilson EM, Oh Y, Rosenfeld RG (1997) Generation and characterization of an IGFBP-7 antibody:Identification of 31 kD IGFBP-7 in human biological fluids and Hs578T human breast cancer conditionedmedia. J Clin Endocrinol Metab Vol 82, 4:1301-1303

3) Baxter RC (1988) Characterization of the acid-labile subunit of the growth hormone-dependent insulin-likegrowth factor binding protein complex. J Clin Endocrinol Metab 67:265-272

4) Baxter RC, Martin JL (1989) Structure of the Mr 140,000 growth hormone dependent insulin-like growthfactor binding protein complex: determinati-on by reconstitution and affinity-labeling. Proc Natl Acad Sci USA86:6898-6902

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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