ALPCO 胰岛素Auto-Ab (IAA) EIA(96孔)提供的物料和样本收集方案

依赖胰岛素的糖尿病（IDDM）或1型糖尿病是一种自身免疫性疾病，其中胰岛素缺乏是胰腺β细胞免疫学破坏的结果。在遗传上易患IDDM的个体中，对β细胞的免疫攻击发生在无症状期（1），这被称为“糖尿病前期”。研究表明，这种糖尿病前期通常在IDDM发病前几年开始。在这个阶段，许多糖尿病前期个体的血液中可以检测到针对胰岛细胞抗原（ICA）和/或胰岛素（IAA）的自身抗体。目前用于测定人血清中IAA的最敏感方法采用放射测定竞争性测定（15）。这个试剂盒是一种用于IAA测定的酶联免疫吸附测定（ELISA）。它使用简单，不需要使用放射性材料。IAA旨在用于研究中，用于检测针对人类胰岛素的循环自身抗体。IAA ELISA检测人胰岛素特异性人IgG的存在。此套件仅供研究使用。不用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品胰岛素Auto-Ab (IAA) EIA(96孔)。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

胰岛素Auto-Ab (IAA) EIA(96孔)检测原理：

人胰岛素固定在微孔上。将参考、阳性和阴性对照以及稀释的血清样本添加到适当的微孔中。血清样品和对照中的人IgG特异性抗体与微孔上的胰岛素分子结合。在洗掉未反应的血清物质后，将酶（碱性磷酸酶）标记的人IgG特异性山羊抗体加入抗原-抗体复合物中。彻底洗涤以去除未结合的酶后，加入底物（PNPP）溶液，用分光光度法测量显色。颜色的强度与样品中IAA的浓度成正比。提供两种质量控制（阳性和阴性）来监测和验证检测结果。

提供的物料：

1. PLA IAA = IAA微孔板条（带支架），12条

2. CONJ ENZ 6X = IAA-IgG酶结合物（浓缩液），2 x 1.0 mL

3. DIL SPE 5X = IAA样本稀释液（浓缩液），1 x 25.0 mL

4. CONJ ENZ DIL = 结合物稀释液，1 x 10.0 mL

5. CTRL REF IAA = IAA参考对照（人血清），1 x 1.5 mL

6. CRTL + IAA = IAA阳性对照（人血清），1 x 1.5 mL

7. CRTL- IAA = IAA阴性对照（人血清），1 x 1.5 mL

8. SUBS PNPP = 底物溶液（PNPP），1 x 15.0 mL

9. BUF WASH 25X = 洗涤缓冲液（浓缩液），1 x 20.0 mL

10. SOLN STP = 终止液（1N氢氧化钠），1 x 6.0 mL

额外需要但未提供的物料：

1. 蒸馏水或去离子水

2. 吸水纸巾，用于洗涤后吸干条带，以及在孵育期间覆盖条带的Parafilm/塑料薄膜

3. 适合血清稀释的合适尺寸的玻璃管

4. 微量移液管和一次性吸头，用于递送10 ?L, 50 ?L, 100 ?L 和 1000 ?L

5. 微孔板洗涤器或挤压瓶用于洗涤

6. 用于递送结合物稀释液的5 mL移液管

7. 500 mL量筒

8. 具有405 nm吸光度能力的微孔板读数器

9. 塑料标签胶带，用于在检测前封贴未使用的孔

样本收集：

通过静脉采血5-10 mL，放入凝血（红色顶部）管中。可以使用血清分离器。通过离心分离血清。血清样本可以存放在2-8°C。测试样本中过多的溶血和大血块或微生物生长的存在可能会干扰测试的性能。如果血清样本在24小时内无法分析，请将其冷冻在-20°C。

试剂准备和储存：

1. IAA-IgG酶结合物复溶：准确将5 mL的结合物稀释液转移到含有IAA-IgG酶结合物（浓缩液）的瓶中。关闭瓶盖并通过倒置彻底混合。始终在2-8°C下储存稀释后的结合物。在标签上记录复溶日期。这种稀释后的试剂在复溶后30天内有效。两个结合物（浓缩液）瓶子中的每一个都足够用于6条测试条。根据需要复溶。

2. IAA样本稀释液缓冲液：如果由于在较低温度如2-8?C下储存，样本稀释液浓缩液中出现沉淀，可以通过将小瓶放入37?C水浴中30分钟来溶解。将全部内容物（25 mL）转移到合适容器中的100 mL蒸馏水/去离子水中。彻底混合；将容器标记为IAA样本稀释液，并在2-8°C下储存。稀释后的试剂在小瓶上显示的有效期前都是稳定的。

3. 洗涤溶液：如果由于在较低温度如2-8°C下储存，洗涤缓冲液浓缩液中出现结晶，可以通过将小瓶放入37?C水浴或培养箱中30分钟来溶解。将全部内容物转移到500 mL容器中的480 mL蒸馏水/去离子水中。彻底混合；将容器标记为洗涤，并在2-8°C下储存。稀释后的试剂在小瓶上显示的有效期前都是稳定的。

4. 血清样本准备：准确将10 ?L（0.010 mL）的血清样本转移到已经标记的玻璃管中的1.0 mL工作样本稀释液中。彻底混合。

文献参考：

1. Eisenbarth, G.S., J. Connelly, and J.S. Soeldner (1987). The natural history of type Idiabetes. Diabet./Metab. Rev., 3:873-891.

2. Hirata, Y., H. Ishizu, N. Ouchi, S. Motomura, M. Abe, Y. Hara, H. Wakasugi, I. Takahashi,H. Sakano, M. Tanaka, H. Kawaao, and T. Kanesaki (1970). Insulin autoimmunity in acase with spontaneous hypoglycemia. Japan J. Diabet., 13:312-319.

3. Goldman, J., D. Baldwin, A.H. Rubenstein, D.D. Klink, W.G. Blackard, L.K. Fisher, T.F.Roe, and J.J. Schnure (1979). Characterization of circulating insulin and proinsulinbinding antibodies in autoimmune hypoglycemia. J. Clin. Invest., 63:1050-1059.

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。