ALPCO 谷氨酸脱羧酶(GAD) ELISA, 96孔微孔板专用，高效检测解决方案

胰岛素依赖型糖尿病（IDDM），1型，是由胰腺β细胞的自身免疫性破坏引起的（1,2）。这种选择性自身免疫性肝切除导致胰岛素分泌完全消除。IDDM血清中特异性胰岛细胞自身抗体的存在证明了免疫证据（3）。在1型糖尿病患者中，已经鉴定出至少三种针对胰岛细胞抗原成分的自身抗体。这些自身抗体特异性地针对胰岛细胞抗原成分（4）、谷氨酸脱羧酶（5）和胰岛素（6）。谷氨酸脱羧酶（GAD）是神经递质抑制剂γ-氨基丁酸（GABA）的生物合成酶（7）。两种形式的GAD，6.5 KDa和67 KDa，由一个基因产生，高度同质（8-10）。在脑和胰岛细胞中鉴定出65 KDa-GAD和67 KDa-GAD，在人类、大鼠和小鼠胰腺中差异表达（11,12）。GAD ELISA试剂盒是一种体外定性ELISA检测方法，用于检测谷氨酸脱羧酶（GAD）抗原的循环自身抗体。这个工具包仅供研究使用。它不用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品谷氨酸脱羧酶(GAD) ELISA, 96孔。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

谷氨酸脱羧酶(GAD) ELISA, 96孔检测原理：

纯化的GAD抗原固定在微孔上。允许血清样本中存在的GAD特异性IgG抗体与抗原反应。多余/未结合的血清蛋白从微孔中洗掉。一种酶（碱性磷酸酶）标记的山羊抗体，对人IgG具有特异性，被添加到GAD抗体复合物中。从微孔中洗掉多余的未反应的酶偶联物后，加入底物（PNPP），用分光光度法测量产生的颜色。颜色的强度直接给出了测试血清样本中GAD自身抗体的浓度。GAD阳性和阴性控制作为内部质量控制，以确保有效结果。

预防措施：

1. 不要冷冻测试试剂，始终将所有试剂盒组分存放在2-8°C的环境中。

2. 每次进行测试时，都必须运行阳性和阴性对照。

3. 只使用清晰的血清作为测试样本。测试样本不应有严重的浑浊、溶血或微生物污染。

4. 所有样本都应进行双重分析。

5. 不要混合不同批次的试剂。

6. 不要使用过期的试剂。

7. 不要让试剂在室温下长时间放置。

8. 不要让底物溶液暴露在光线下。

9. 为了获得可重复和准确的结果，需要精确的移液技术。

提供的物料：

1. PLA GAD = GAD-微孔板条（带支架），12条

2. CONJ ENZ 6X = GAD-酶结合物（浓缩液），2 x 1.0 ml

3. DIL SPE 5X = 样本稀释液（浓缩液），1 x 25.0 ml

4. CONJ ENZ DIL = 结合物稀释液，1 x 10.0 ml

5. CAL GAD CAL 1-3 = GAD-校准品（1,2,3）（人血清），1 x 1.5 ml

6. CTRL - GAD = GAD-阴性对照（人血清），1 x 1.5 ml

7. CTRL + GAD = GAD-阳性对照（人血清），1 x 1.5 ml

8. SUBS PNPP = 底物溶液（PNPP），1 x 15.0 ml

9. BUF WASH 25X = 洗涤缓冲液（浓缩液），1 x 20.0 ml

10. SOLN STP = 终止液（1N氢氧化钠），1 x 6.0 ml

额外需要但未提供的物料：

1. 蒸馏水或去离子水。

2. 吸水纸巾，用于洗涤后吸干条带，以及在孵育期间覆盖条带的Parafilm/塑料薄膜。

3. 适合血清稀释的合适尺寸的玻璃管。

4. 微量移液管和一次性吸头，用于递送10 ?l、50 ?l和100 ?l。

5. 微孔板洗涤器或挤压瓶用于洗涤。

6. 用于递送结合物稀释液的1-5 mL移液管。

7. 500 mL量筒。

8. 具有405 nm吸光度能力的微孔板读数器。

9. 离心机。

10. 塑料标签胶带，用于在检测前封贴未使用的孔。

11. 计时器

样本收集：

通过静脉采血5-10 ml，放入凝血（红色顶部）管中。可以使用血清分离器。通过离心分离血清。血清样本可以存放在2-8°C。测试样本中过多的溶血和大血块或微生物生长的存在可能会干扰测试的性能。如果血清样本在24小时内无法分析，请将其冷冻在≤ -20°C。

文献参考：

1. Cooke, A. (1990). An overview on the possible mechanism of destruction of theinsulin-producing beta cell. Curr. Top. Microbiol. Immunol. 164:125-142.

2. Harrison, L.C., I.L. Campbell, P.G. Colman, et al (1990). Type 1 diabetes:Immunology andImmunotherapy. Adv. Endocrinol. Metab. 1:35-94.

3. Bottazzo, G.F., A. Florin-Christensen, and D.Doniach ( 1974). Islet cellantibodies in diabetes mellitus with autoimmune polyendocrine deficiencies.Lancet, ii:1279-1283. 

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。