ALPCO 刚地弓形虫(IgA) ELISA，(96孔)检测原理&注意事项

弓形虫IgA酶免疫测定试剂盒为定性和半定量测定人血清或血浆中弓形虫IgA类抗体（EDTA或肝素）提供了材料。本试验仅供研究使用。不适用于独立程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品刚地弓形虫(IgA) ELISA，(96孔)。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

刚地弓形虫(IgA) ELISA，(96孔)检测原理：

弓形虫IgA ELISA试剂盒是一种固相酶联免疫吸附测定（ELISA）。样本用样本稀释液稀释，并额外与IgG-RF吸附剂一起孵育，以消除特定IgG的竞争性抑制。这种预处理避免了假阴性结果。

微孔板作为固相，涂有灭活的弓形虫可溶性抗原（RH株）。稀释后的样本和现成可用的对照品被移液至这些孔中。在孵育过程中，阳性样本和对照品中的弓形虫特异性抗体与固定的抗原结合。

经过洗涤步骤去除未结合的样本和对照材料后，辣根过氧化物酶结合的抗人IgA抗体被加入孔中。在第二次孵育过程中，这种抗IgA结合物特异性地结合到IgA抗体上，形成酶联免疫复合物。

经过第二次洗涤步骤去除未结合的结合物后，形成的免疫复合物（在阳性样本的情况下）通过与TMB底物孵育和发展出蓝色来检测。通过使用硫酸停止酶指示剂反应，蓝色变为黄色。

这种颜色的强度与样本中弓形虫特异性IgA抗体的数量直接成正比。使用ELISA微孔板读数器在450纳米处读取吸光度。

提供的试剂：

1. 微孔板，12 x 8（可拆分）条，96孔；孔涂有灭活的弓形虫可溶性抗原（RH株）。（包括1个条架和1个盖箔）

2. 样本稀释液*，1瓶，100 mL，即用型，呈黄色；pH 7.2 ± 0.2。

3. IgG-RF-吸附剂*，1瓶，6.5 mL，即用型，呈黄色；含有抗人IgG类抗体。

4. 阳性对照*，1瓶，1.0 mL，即用型；呈黄色，红色瓶盖。

5. 阴性对照*，1瓶，2.0 mL，即用型；呈黄色，黄色瓶盖。

6. 截止对照*，1瓶，2.0 mL，即用型；呈黄色，黑色瓶盖。

7. 酶结合物*，1瓶，20 mL，即用型，呈红色，抗人IgA抗体结合到辣根过氧化物酶。

8. 底物溶液，1瓶，14 mL，即用型，四甲基联苯胺（TMB）。

9. 停止溶液，1瓶，14 mL，即用型，含有0.2 mol/l H2SO4，避免与停止溶液接触。它可能会引起皮肤刺激和灼伤。

10. 洗涤溶液*，1瓶，30 mL（20倍浓缩用于600 mL），pH 6.5 ± 0.1，见“试剂准备”。* 含有非汞防腐剂

一般说明：

? 在开始测试之前，非常重要的一点是将所有试剂、样本和对照品置于室温！

? 一旦测试开始，应不间断地完成所有步骤。

? 使用新的一次性塑料移液管尖嘴吸头，每个标准品、对照品或样本都要更换，以避免交叉污染。

? 吸光度是孵育时间和温度的函数。在开始测定之前，建议所有试剂都准备好，移除瓶盖，所有需要的孔都固定在架上等。这将确保每个移液步骤的间隔时间相等，无中断。

? 通常，酶促反应与时间和温度成线性关系。

? 使用后立即紧密封闭试剂瓶，以避免蒸发和微生物污染。

? 为了避免交叉污染和错误升高的结果，准确移液样本，并在不溅出的情况下将结合物准确分配到孔的底部。

? 在37°C孵育期间，用箔纸覆盖微孔板条，以避免蒸发。

文献参考：

1. P. Cassinotti, Human Toxoplasma gondii infections and their diagnosis Alpe Adria Microbiologiy Journal1995, 4, 235-246

2. M. Schleuning, Toxoplasma gondii Infektionen Deutsches ?rzteblatt 93, Heft 43, (Oktober 1996), B2182-B2185

3. NCCLS. Clinical Use and Interpretation of Serologic Tests for Toxoplasma gondii; Approved Guideline.NCCLS document M36-A [ISBN 1-56238-523-2]. NCCLS, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA19087-1898 USA, 2004.

4. Wilson M, Jones JL, McAuley JM. Toxoplasma. In: Murray PR, Baron EJ, Pfaller MA, Jorgensen JH,Yolken RH, editors. Manual of Clinical Microbiology. 8th ed. Washington, D.C.: American Society forMicrobiology; 2003. p. 1970-1980.

5. Remington JS, McLeod R, Thulliez P, Desmonts G. Toxoplasmosis. In: Remington JS, Klein JO, editors.Infectious Diseases of the Fetus and Newborn Infant. 5th ed. Philadelphia, PA: The WB Saunders Co.;2001. p. 205-346.

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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