ALPCO 游离β人绒毛膜促性腺激素ELISA试剂盒检测程序

游离β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）ELISA是一种酶免疫测定法，用于定量测定人血清和EDTA血浆中的游离β-HCG。仅供研究使用。不适用于独立程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品 游离β人绒毛膜促性腺激素(?-HCG) ELISA试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

游离β人绒毛膜促性腺激素(?-HCG) ELISA试剂盒检测原理：

游离β-hCG ELISA试剂盒是一种基于夹心原理的固相酶联免疫吸附测定（ELISA）。微孔板孔中包被了一种针对游离β-hCG分子上独特抗原位点的单克隆[小鼠]抗体。含有内源性游离β-hCG的样本在包被孔中与酶结合物孵育，酶结合物是一种与辣根过氧化物酶结合的抗β-hCG抗体（兔源）。孵育后，未结合的结合物被洗去。结合的过氧化物酶量与样本中游离β-hCG的浓度成正比。加入底物溶液后，产生的色度强度与样本中游离β-hCG的浓度成正比。通过加入终止溶液来停止比色反应，测量产生的黄色产物的光学密度（OD）。通过绘制标准品的OD值与浓度的标准曲线，使用该标准曲线确定未知样本的浓度。

储存条件：

未打开的试剂盒和试剂以及打开的试剂必须储存在2°C至8°C的温度下。在2°C-8°C下储存时，未开封的试剂将保持反应性，直至到期。请勿在此日期之后使用代理。如果按照上述描述储存，并在试剂盒标签上的有效期内，打开的试剂盒可以保留四周的活性。微量滴定板包含可折断的条带。未使用的井必须存放在2°C至8°C的密封箔袋中，包括干燥剂，并在提供的板框中使用。一旦箔袋被打开，必须小心再次将其紧紧关闭。一旦打开，试剂瓶必须再次紧紧关闭。

检测程序：

每次运行都必须包含一个标准曲线。

1. 在架上固定所需数量的微孔板孔。

2. 使用新的一次性吸头，向相应的孔中分别加入50 ?L的标准品、对照品和样本。

3. 向每个孔中加入100 ?L的零标准缓冲液。

彻底混合30秒。这一步骤的完全混合非常重要。

4. 在37°C下孵育30分钟。

5. 迅速摇动以倒出孔中的内容物。

使用1X工作洗涤液（每个孔400 ?L）冲洗孔5次。在吸水纸上猛击孔以去除残留的液滴。

重要提示：洗涤程序的正确执行会显著影响这个检测的灵敏度和精确度！

6. 向每个孔中加入150 ?L的酶结合物。

7. 在37°C下孵育30分钟。

8. 迅速摇动以倒出孔中的内容物。

使用1X工作洗涤液（每个孔400 ?L）冲洗孔5次。在吸水纸上猛击孔以去除残留的液滴。

9. 向每个孔中加入100 ?L的底物溶液。

10. 在室温下孵育20分钟。

11. 通过向每个孔中加入100 ?L的终止溶液来停止酶促反应。

重要的是确保所有的蓝色完全变为黄色。

12. 使用微孔板读取器，在450 ±10 nm处测定每个孔的吸光度（OD）。

建议在加入终止溶液后15分钟内读取孔的吸光度。

文献参考：

1. Engall, E., Methods in Enzymology, volume 70, Van Vunakis, H. and Langone, J.J. (eds.),Academic Press, new York, 419-492 (1980).

2. Uotila M., Rips?ajto, E. and Engvall E., J.Immunol. Metods, 42, 11-15 (2981)

3. Brizot, ML, Jauniaux E. Mckie AT, Farzaneh F and Niclaides KH. Hum. Reprod. 1995; 10;2506-9.

4. Forest JC, Masse J, Rousseau F, Moutquin JM, Brideau NA and Belanger M. Clin.Biochem. 1995; 28:443-9.

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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