Bi-CAT(肾上腺素和去甲肾上腺素)ELISA预期用途和原理及测试程序说明

在人类中，儿茶酚胺类物质如肾上腺素（epinephrine）、去甲肾上腺素（norepinephrine）和多巴胺是交感神经系统的神经递质，参与许多生理过程。交感神经系统使身体处于高度警戒状态，也被称为身体的战斗或逃跑反应。此外，儿茶酚胺及其代谢产物表明了身体对急性和慢性压力的适应。

艾美捷Bi-CAT(肾上腺素和去甲肾上腺素)ELISA（ALP-17-BCTHU-E02.1）内容：

1.密封箔-即用型

内容：密封箔，包装在可重新密封的袋中

体积：2x4箔

2.洗涤缓冲液浓缩液-浓缩50倍

内容：含有非离子洗涤剂和生理pH值的缓冲液

体积：2x20mL/瓶，紫色瓶盖

3.酶结合物-即用型

内容：山羊抗兔免疫球蛋白，与过氧化物酶结合

体积：2x12mL/瓶，红色瓶盖

4.底物-即用型

内容：含有3,3',5,5'-四甲基联苯胺的显色底物，底物缓冲液和过氧化氢

体积：2x12mL/瓶，黑色瓶盖

5.终止液-即用型

内容：0.25M硫酸

体积：2x12mL/瓶，灰色瓶盖

6.肾上腺素微孔板条-即用型

内容：1x96孔（12x8）预涂抗原微孔板，包装在可重新密封的蓝色袋中，含干燥剂

7.去甲肾上腺素微孔板条-即用型

内容：1x96孔（12x8）预涂抗原微孔板，包装在可重新密封的黄色袋中，含干燥剂

8.肾上腺素抗血清-即用型

内容：含有蛋白质（牛）和非汞防腐剂的兔抗肾上腺素抗体，蓝色

体积：1x6mL/瓶，蓝色瓶盖

9.去甲肾上腺素抗血清-即用型

内容：含有蛋白质（牛）和非汞防腐剂的兔抗去甲肾上腺素抗体，黄色

体积：1x6mL/瓶，黄色瓶盖

10.调整缓冲液-即用型

内容：TRIS缓冲液

体积：1x4mL/瓶，绿色瓶盖

Bi-CAT(肾上腺素和去甲肾上腺素)ELISA预期用途和原理：

Bi-CAT酶免疫测定用于人血浆和尿液中肾上腺素（epinephrine）和去甲肾上腺素（norepinephrine）的定量测定。仅限研究使用，不用于诊断程序。

肾上腺素（epinephrine）和去甲肾上腺素（norepinephrine）通过使用顺式二醇特异性亲和凝胶进行提取，然后进行酰化，并随后进行酶促转化。竞争ELISA试剂盒使用微孔板格式。抗原绑定到微孔板的固相上。酰化的标准品、对照品和样品与固相结合的分析物竞争有限的抗体结合位点。系统达到平衡后，通过洗涤去除游离抗原和游离抗原-抗体复合物。使用TMB作为底物，通过抗兔IgG-过氧化物酶结合物检测固相上结合的抗体，产生颜色反应。在450nm处监测反应。通过将未知样品的吸光度与已知标准浓度的标准曲线进行比较，实现未知样品的定量。建议手动处理ELISA。自动化实验室设备的验证是用户的责任。

样品收集和储存：

血浆

应该将全血收集到含有EDTA作为抗凝剂的离心管中，并在收集后立即按照制造商的说明进行离心。

如果出现溶血、黄疸或脂血的样品，参见2.2.1节。

储存：在2-8°C下最长储存6小时，较长时间（最长6个月）在-20°C下储存。

应避免反复冻融。

尿液

可以使用自发尿液或24小时尿液，收集在含有10-15毫升6M盐酸的瓶中。

如果使用24小时尿液，请记录收集的尿液总量。

储存：在2-8°C下最长储存48小时，在室温下最长储存24小时，较长时间（最长6个月）在-20°C下储存。

应避免反复冻融。

避免直接暴露在阳光下。

测试程序：

使用前让所有试剂和样品达到室温，并轻轻倒置充分混合。

标记提取板和微孔板（从框架中取出使用的微孔条应相应标记，以避免混淆）。

建议进行双重测定。

建议在微孔板使用前对微孔条进行编号，以避免混淆。

抗血清的结合、酶结合物的结合以及酶的活性都与温度有关。

温度越高，吸光度值越高。

不同的孵育时间对吸光度也有类似的影响。

酶免疫测定过程中的最佳温度在20-25°C之间。

注意：使用振幅约为3毫米、大约600转/分钟的微孔板振荡器是强制性的。

不同设置的振荡可能会影响结果。

注意：如果出现溢出，在使用设置为405纳米的微孔板读取器读取孔中溶液的吸光度，需在10分钟内完成。

典型标准曲线示例，请勿用于计算！

Bi-CAT(肾上腺素和去甲肾上腺素)ELISA文献参考：

(1) Kim et al. Vitamin C prevents stress-induced damage on the heart caused by the death of

cardiomyocytes, through the down-regulation of the excessive production of

catecholamine, TNF-α, and ROS production in GULO(-I-) Vit C-Insufficient mice. Free

Radical Biology and Medicine, 65:573-583 (2013)

(2) Bada et al. Peripheral vasodilatation determines cardiac output in exercising humans: insight

from atrial pacing. The Journal of Physiology, 590(8):2051-2060 (2012)

(3) Parks et al. Employment and work schedule are related to telomere length in women.

Occupational & Environmental Medicine 68(8):582-589 (2011)