ALPCO Bi-CAT（研究）ELISA：高灵敏度肾上腺素和去甲肾上腺素定量检测方法

Bi-CAT酶免疫分析是一种用于定量测定肾上腺素（epinephrine）和去甲肾上腺素（norepinephrine）的酶免疫分析方法。该试剂盒是一个灵活的测试系统，适用于各种生物样本类型和体积。仅供研究使用，不用于诊断程序。肾上腺素和去甲肾上腺素通过使用特定的亲和凝胶进行提取，然后进行酰化处理，并最终通过酶促反应转化。竞争性ELISA试剂盒采用微孔板格式，其中抗原与微孔板的固态相绑定。经过酰化处理的标准品、对照品、样本与固态相绑定的分析物竞争有限的抗体结合位点。系统达到平衡后，通过洗涤步骤去除未结合的抗原和抗原-抗体复合物。使用以TMB为底物的抗兔IgG-过氧化物酶结合物检测与固态相绑定的抗体，产生颜色反应。该反应在450nm处进行监测。通过与已知标准浓度的标准曲线比较，实现对未知样本的定量。建议手动处理ELISA，并由用户负责验证自动化实验室设备的准确性。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品Bi-CAT（研究）ELISA。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

Bi-CAT（研究）ELISA程序注意事项、指南和警告

(1) 本试剂盒仅供专业人士使用。用户应充分理解本协议，以成功使用本试剂盒。只有试剂盒附带的测试说明书有效，必须使用该说明书进行测试。只有严格遵守和仔细遵循所提供的说明书，才能获得可靠的性能。

(2) 必须遵循良好实验室规范（GLP）的原则。

(3) 为减少接触潜在有害物质，必要时请穿实验服、戴一次性手套和护目镜。

(4) 所有试剂盒试剂和样本在使用前应放置至室温，并轻轻但彻底混合。避免试剂和样本反复冻融。

(5) 稀释或重组时，请使用去离子水、蒸馏水或超纯水。

(6) 微孔板含有易折断的条。未使用的孔必须存放在2-8°C的密封铝箔袋中，并在使用时放在提供的框架中。从框架中取出的条应标记，以避免混淆。

(7) 强烈建议进行双重样本测量，以帮助识别任何移液错误。

(8) 一旦开始测试，必须不间断地完成所有步骤。确保所需的试剂、材料和设备在适当的时间准备就绪。

(9) 孵育时间会影响结果。孔的处理应按照相同的顺序和时间间隔进行。

(10) 为避免试剂交叉污染，请使用新的一次性移液器枪头分配每种试剂、样本、标准品和对照品。

(11) 每次运行都必须建立标准曲线。

(12) 每次运行都应包括对照品，并且必须在建立的置信限内。置信限列在QC报告中。

(13) 不要在测试中混合不同批号的试剂盒组分，不要使用试剂盒标签上显示的过期日期之后的试剂。

(14) 避免接触含有0.25 M H2SO4的停止液。它可能会引起皮肤刺激和灼伤。如果接触到眼睛或皮肤，请立即用水冲洗。

(15) TMB底物对皮肤和粘膜有刺激性。如果可能接触到，请用大量水冲洗眼睛，用肥皂和大量水清洗皮肤。在重复使用之前清洗受污染的物品。

(16) 有关试剂盒中包含的危险物质的信息，请参考安全数据表（SDS）。该试剂盒的安全数据表可直接在ALPCO网站上获得或根据要求提供。

(17) 试剂盒试剂必须视为危险废物，并根据当地和国家法规进行处理。

(18) 如果试剂盒或组件有任何严重损坏，必须在收到试剂盒后一周内书面通知ALPCO。严重损坏的单个组件不得用于测试运行。它们必须妥善存放，直到做出决定。如果决定它们不再适合测量，必须按照当地和国家法规进行处理。

结果计算

通过绘制标准品的吸光度读数（计算平均吸光度，线性，y轴）与相应的标准品浓度（对数，x轴）的图，可以得到用于确定样品中浓度的标准曲线，标准A的浓度为0.001 ng/mL。由于数据以对数形式呈现，这种对齐是强制性的。使用非线性回归进行曲线拟合（例如4参数，Marquardt算法）。这项检测是一种竞争性检测。这意味着：随着分析物浓度的增加，OD值会降低。在标准曲线下方发现的OD值对应于样品中分析物的高浓度，必须报告为阳性。从标准曲线上取得的样品浓度必须乘以一个校正因子。

校正因子 = 20 ?L（提取的标准品体积）/ 提取的样品体积（?L）

例如：提取了750 ?L的样品。从标准曲线上得到浓度为0.15 ng/mL的去甲肾上腺素。

校正因子 = 20/750 = 0.027

样品浓度 = 0.15 ng/mL x 0.027 = 0.004 ng/mL = 4 pg/mL 去甲肾上腺素

转换

肾上腺素 (ng/mL) x 5.46 = 肾上腺素 (nmol/L)

去甲肾上腺素 (ng/mL) x 5.91 = 去甲肾上腺素 (nmol/L)

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

作为ALPCO在中国区域的代理，艾美捷科技有限公司将为中国客户提供全面的ALPCO产品。