ALPCO 肾素活性ELISA试剂盒样本预处理、血管紧张素I生成和储存方案

新的A法用于定量测定人EDTA血浆中的血浆肾素活性（PRA）ELISA（酶联免疫吸附试验）。仅供研究使用。不用于诊断程序。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO热销产品肾素活性ELISA试剂盒。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

肾素活性ELISA试剂盒检测原理：

在免疫分析开始之前，向每个血浆样本中添加蛋白酶抑制剂（PMSF），以防止血管紧张素I（Ang-I）的降解。然后向每个血浆样本中加入生成缓冲液，使样本的pH值达到约6.0。血浆样本被分成两份，分别在0-4°C（冰浴中）和37°C下孵育。在37°C下孵育的部分将由血浆中的肾素产生Ang-I。

PRA ELISA是一种竞争性分析。在第一次孵育步骤中，校准液、对照品、样本中的Ang-I与Ang-I-生物素缀合物（生物素缀合物）之间发生竞争，以争夺微孔板孔中有限数量的抗Ang-I抗体结合位点。在这次孵育过程中，存在蛋白酶抑制剂以防止Ang-I降解成更小的肽。在第二次孵育步骤中，加入链霉亲和素-HRP缀合物，它特异性地与任何结合的生物素缀合物结合。通过洗涤步骤去除未结合的链霉亲和素-HRP缀合物。接下来，加入TMB底物（酶底物），它与HRP反应形成蓝色产物，其颜色的深浅与Ang-I的含量成反比。通过添加终止液来终止酶促反应，将蓝色变为黄色。在450纳米处的微孔板读取器上测量吸光度。使用一组校准液绘制校准曲线，从中可以直接读取样本和对照品中Ang-I的浓度。根据0°C和37°C下孵育的样本以及使用的时间，计算血浆样本中的血浆肾素活性浓度。结果以单位时间内每体积人血浆产生Ang-I的质量（ng/mL/h）表示。

样本预处理、血管紧张素I生成和储存：

在进行测试之前，所有处理过的血浆样本必须根据以下所述的血管紧张素I生成程序进行预处理。完成此程序后，每个血浆样本将有两个预处理的分装样本，一个0°C分装样本和一个37°C分装样本。

1. 如果使用的是新鲜抽取的血浆样本，请继续进行步骤2。如果使用的是冷冻血浆样本，请将冷冻血浆样本快速升温至室温，方法是将试管放入室温水浴中。

2. 将每个血浆样本的0.5 mL转移到一个新的样本管中。

3. 向每个血浆样本的0.5 mL中加入5 ?L准备好的PMSF溶液（1:100比例）。使用涡旋混合器彻底混合每个试管。

4. 向步骤3处理过的样本中加入50 ?L生成缓冲液（1:10比例）。再次使用涡旋混合器彻底混合试管。

5. 从步骤4的样本中用移液管取0.25 mL到一个新的样本管中。现在将有两个处理过的血浆样本分装。将一个标记为0°C，另一个标记为37°C。

6. 同时将标记为37°C的试管放入37°C的孵箱中，将标记为0°C的试管放入冰浴（0-4°C）中90分钟或更长时间（不要超过180分钟）。务必记录使用的孵育时间，因为这是需要计算血浆肾素活性的。

7. 孵育期结束时，将37°C的试管放入冰浴中5分钟以快速冷却。

8. 如果生成的样本将立即进行测试，将两个样本管（0°C和37°C）放入室温水浴中5-10分钟，使其升温至室温。现在样本已准备好进行测试。

9. 如果生成的样本将在稍后进行测试，请立即将两个样本管（0°C和37°C）冷冻在≤-20°C下，最长可保存3个月。使用前，将冷冻生成的样本放入室温水浴中5-10分钟，使其升温至室温。现在样本已准备好进行测试。

典型校准曲线

仅示例曲线，不用于计算结果

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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