ALPCO/艾美捷胰岛素样生长因子结合蛋白1,ELISA测试原理

ALPCO-胰岛素样生长因子结合蛋白1,ELISA：用于通过酶免疫测定法直接定量测定人血清中的胰岛素样生长因子结合蛋白-1。

预期用途：

用于人血清中胰岛素样生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）的直接定量测定，通过酶联免疫测定法。仅供研究使用。不得用于诊断程序。

艾美捷ALPCO胰岛素样生长因子结合蛋白1,ELISA(#ALP-11-IGFHU-E01)测试原理：

以下酶联免疫测定试验的原理遵循典型的两步捕获或“夹心”类型测定。该测定利用两种高度特异性的单克隆抗体：一种针对IGFBP-1的单克隆抗体固定在微孔板上，另一种针对IGFBP-1不同区域的单克隆抗体与辣根过氧化物酶（HRP）结合。在第一步孵育中，样本、校准品和对照品中存在的IGFBP-1被固定在微孔板上的抗体结合。通过洗涤步骤去除过量的和未结合的物质。在第二步孵育中，加入HRP结合物并特异性地结合任何固定的IGFBP-1，形成夹心复合物。通过洗涤步骤去除未结合的HRP结合物。接下来，加入TMB底物，与HRP反应形成蓝色产物，其与结合的IGFBP-1量成正比。通过加入终止溶液终止酶促反应，将颜色从蓝色变为黄色。在微孔板读数器上于450nm处测量吸光度。使用一组校准品绘制校准曲线，从而可以直接读取样本和对照品中IGFBP-1的含量。

样本收集与储存：

每次重复测定需要大约0.1毫升的血清。收集4-5毫升静脉血至适当标记的试管中，并让其凝固。在室温下离心，然后小心地将血清层转移到新的储存管中。如果分析将在稍后进行，可将其储存在2-8°C下长达24小时，或在-10°C或更低的温度下储存。将所有人类样本视为可能的生物危害物质，并在处理时采取适当的预防措施。

样本预处理：

本测定是一个直接系统；不需要样本预处理。

试剂和设备需求但不提供：

- 校准的单通道移液管，用于分配25微升

- 校准的多通道移液管，用于分配50微升和100微升

- 校准的多通道移液管，用于分配300微升（如果手动洗涤）

- 自动微孔板洗涤器（推荐）

- 一次性移液管尖

- 蒸馏水或去离子水

- 微孔板振荡器：

- 轨道振荡器（直径3毫米）设置为600转每分钟

- 或往复振荡器（行程长度1.5英寸）设置为每分钟180次振荡

- 校准的微孔板读数器，带有450纳米的滤光片和3.0或更高的上OD限制

- 计时器

计算：

1. 计算每个校准品、对照品和血清样本重复测定的平均光密度。

2. 从校准品、对照品和血清样本的平均吸光度值中减去“0”校准品的平均吸光度值。

3. 在对数-对数纸上绘制校准曲线，以平均光密度为Y轴，校准品浓度为X轴。如果使用免疫分析软件，推荐使用4参数或5参数曲线。

4. 直接从校准曲线上读取对照品和样本的值。

5. 如果样本读数超过220微克/升，用校准品A稀释，稀释因子不超过1:10。所得结果应乘以稀释因子。

质量控制：

在评估测试结果的有效性时，应评估以下标准：

1. 校准品A的平均光密度符合QC证书中所述的可接受范围。

2. 试剂盒对照品所得值在QC证书中所述的可接受范围内。

3. 使用的任何外部对照品的结果符合可接受范围。

典型表格数据：

仅样本数据。不要用来计算结果。

艾美捷科技是ALPCO的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。